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chsD文献资料
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烟曲霉Af293 chsD基因缺失突变株的构建
目的 构建Af293 chsD缺失突变株,并对chsD的功能进行初步的研究.方法 PCR扩增chsD两侧部分序列并连接至pPK2质粒的潮霉素表达盒两端,从而构建重组质粒pPK2/chsD-(L+R).酶切pPK2/chsD-(L+R)并胶回收含chsD左侧、hph表达盒及chsD右侧的片段,连接至pDHt/SK而构建二元质粒pDHt/chsD∷hph.经ATMT方法将pDHt/chsD∷hph转化至Af293,经潮霉素抗性筛选从而获得烟曲霉△chsD突变株,并测量Af293,△chsD突变株生长直径及扫描电镜下观察分生孢子形态.结果 经PCR初步鉴定,筛选出的突变株中,其染色体中的chsD序列已被hph置换,初步形态研究表明,△chsD突变株的生长速度显著低于Af293野生型,且分生孢子凹陷呈干瘪状.结论 成功获得Af293△chsD突变株.chsD基因功能初步研究表明,chsD可能与烟曲霉的生长相关.
