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高产纤维素酶菌株的筛选及药渣发酵工艺研究
采用比色法对供试的Z1、Z2、Z3和Z4等4株真菌进行筛选并对其发酵药渣的条件进行了研究.结果表明,菌株Z1为高产纤维素酶菌株,其发酵药渣的佳条件是含水量40%,初始pH 3.8,培养温度28℃.通过初步鉴定,菌株Z1为烟曲霉.
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膜性肾病合并烟曲霉感染一例
曲霉菌是环境中常见的分离菌,但绝大多数免疫力正常人不会感染.然而,对于免疫缺陷的个体,可能导致严重的感染.膜性肾病(membranous glomerulonephritis,MN)是以免疫损伤为发病机制,应用激素可致患者免疫损伤.现对1例MN因长期应用激素治疗导致其血培养检出烟曲霉的病例报告如下.患者男性,49岁,2012年8月因反复咳嗽在医院就诊,CT检查发现“胸腺瘤”,行切除术.2014年1月病理科肾活检:肾小球无增生性和炎症渗出性病变,毛细血管上皮侧形成“钉突”,诊断为“膜性肾病”.
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烟曲霉对唑类药物耐药研究的新进展
烟曲霉是一种重要的临床致病真菌,可引发致死性霉菌感染.唑类药物是治疗各类曲霉病的临床一线药物.近年来,全世界范围内烟曲霉对唑类药物耐药的报道不断增加,严重影响临床和农药唑类药物使用的有效性,已成为一个重要公共卫生问题.本文主要对烟曲霉唑类药物耐药的流行现状、耐药分子机制、耐药产生的原因、耐药株的进化规律以及防控措施等分别进行介绍.
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四君子汤对小鼠侵袭性肺曲霉病作用的实验研究
目的:研究四君子汤对侵袭性肺曲霉痛(IPA)模型小鼠的作用.方法:将小鼠随机分成8组,建立IPA模型后分别给小鼠灌服高、中、低不同剂量四君子汤及酮康唑7d,于第8天处死,取肺、肝、脾、肾做组织烟曲霉培养及病理切片,观察各脏器烟曲霉菌的培养情况及病理变化,同时另取小鼠做生存实验.结果:不同剂量四君子汤治疗组小鼠各脏器烟由霉的菌落数均比IPA模型组少,烟曲霉色素明显减弱,以中剂量组为明显;病理切片结果显示,IPA模型组肺组织可见大量菌丝,中剂量和高剂量四君子汤组肺组织未见菌丝,低剂量组可见少量菌丝.生存实验表明,中剂量四君子汤组小鼠的生存时间及质量明显优于IPA模型组.结论:四君子汤可缓解IPA小鼠的肺组织病理损伤,明显减缓IPA的发展,尤以中、高剂量组明显.
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格木内生真菌烟曲霉的代谢产物
采用GPY培养基对格木内生真菌烟曲霉Aspergillus fumigatus菌株进行培养发酵,发酵产物经冻融处理后分离得到菌液与菌丝体.菌丝体经乙醇提取后,分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取,根据肿瘤细胞毒活性筛选结果,选择菌体的乙酸乙酯萃取物进行化学成分研究.运用硅胶色谱柱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱、反相柱色谱和制备HPLC等多种色谱技术,采用波谱学方法从中分离鉴定了5个二酮哌嗪化合物,其结构分别为cyclo-(R-Pro-R-Phe)(1),cyclo-( trans-4-OH-D-Pro-D-Phe)(2),cyclo-(R-Tyr-S-Ile)(3),cyclo- (R-Phe-S-Ile)(4),cyclo-(R-Val-S-Tyr) (5).
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不同免疫状态小鼠烟曲霉感染后肺组织dectin-1 mRNA表达
目的 研究不同免疫状态小鼠感染烟曲霉后肺组织dectin-1 mRNA表达变化.探讨免疫抑制剂对dectin-1表达的影响与疾病发展的相互关系.方法 小鼠分4组:正常对照组、免疫抑制组、免疫抑制种菌组及免疫正常种菌组.采用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠不同时间点肺组织dectin-1 mRNA表达.同时进行肺组织真菌载量测定观察疾病发展情况.结果 小鼠感染烟曲霉后第3天,免疫抑制种菌组菌载量明显高于正常种菌组.在感染后第1天及第3天,免疫抑制组小鼠肺组织dectin-1表达较正常对照组明显降低;第3天,免疫正常种菌组表达较正常对照组及免疫抑制种菌组明显升高(P<0.05).结论 对于免疫正常宿主,dectin-1可能在防御烟曲霉感染中起重要作用.环磷酰胺可降低肺组织dectin-1 mRNA表达,可能与其促发侵袭性肺曲霉病有关.
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烟曲霉pbs2基因功能初步探讨
目的 克隆烟曲霉pbs2基因,并构建烟曲霉pbs2基因突变株,了解该基因对烟曲霉形态学影响以及对渗透压、氧化压力物质敏感性的变化.方法 通过基因同源性比对,在烟曲霉基因组找出与酿酒酵母pbs2基因同源的序列,分析其结构并通过PCR扩增烟曲霉pbs2基因连同其上下游各约1.0 kb的DNA片段,将该片段重组到质粒pDHt/SK中形成PA,再通过PCR扩增pyrG作为筛选标记插入到PA的pbs2基因开放阅读框架(ORF)中,构建好pbs2基因敲除载体PB.将敲除载体转化到根瘤农杆菌,再利用ATMT法转化嘧啶营养缺陷株烟曲霉AF293.1,筛选出烟曲霉pbs2基因缺陷株△Pbs2.观察突变株和野生株AF293在基础培养基上的生长速度并测定二者对渗透压、氧化压力物质敏感性的变化.结果 经过SMART软件分析发现烟曲霉pbs2基因编码一种磷酸转移酶.在基础培养基上△pbs2生长速度同野生株间差异无统计学意义(P＞0.05),但在氧化压力和渗透压的信号传导中,△pbs2对氧化压力和渗透压的敏感性较野生株AF293敏感.结论 烟曲霉中pbs2基因不仅参与渗透压的传导,还参与氧化压力的传导,但只参与传导特定的氧化压力.
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实时定量PCR检测人全血标本中烟曲霉基因组载量的方法及临床应用
目的 建立实时定量PCR(RQ-PCR)快速检测人全血标本中烟曲霉基因组载量的方法及进行初步临床应用.方法 基于烟曲霉多拷贝基因ITS1-5.8S基因设计引物和TaqMan探针,用QIAamp(R)DNA Blood Mini Kit提取烟曲霉基因组DNA,建立20μl RQ-PCR反应体系,对含有不同载量烟曲霉基因组的模拟人全血标本和66份外科发热患者全血标本进行烟曲霉基因组的定量检测.结果 检测限为10-1基因组/μl上机待测液(即约78 CFU/ml全血);检测特异度和灵敏度分别为94.25%和99.04%,阳性预告值和阴件预告值分别为97.63%和97.62%;测定结果的平均相对误差为(3.67±13.19)%;批内及批间平均重复性变异系数分别为(12.38±1.53)%和(16.27±2.72)%;人血标本中烟曲霉基因组平均回收率为(107.81±25.92)%,回收率平均变异系数为(26.24±5.62)%.66份外科发热患者血标本中未检测出烟曲霉基因组.结论 RQ-PCR可以快速、特异、灵敏地定量检测人血标本中烟曲霉基因组的载量,且有着较好的准确度与精密度.本研究外科发热患者血中未检测到烟曲霉基因组.
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Toll样受体在机体抵抗烟曲霉感染中的作用
目前,侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis,IA)已成为一种常见且严重的感染性疾病,约90%的IA因烟曲霉感染所致.烟曲霉是广泛存在于自然环境中的一种条件致病性真菌,其致病性与宿主的免疫状态密切相关,但临床上也发现曲霉感染可见于免疫功能正常的人群[1-2].含曲霉孢子的气溶胶经气道吸入是导致IA的主要感染途径,孢子进入下呼吸道和肺泡后发育成菌丝,菌丝在肺组织快速生长繁殖并侵入血管,引起炎症反应与肺组织破坏、肺血管壁坏死和管腔阻塞等病理改变,并可发生其他脏器的血型播散性感染,导致IA.包括呼吸道黏膜屏障、病原体识别系统对曲霉的识别、巨噬细胞与中性粒细胞对孢子和菌丝的吞噬杀伤以及抗菌活性物质对真菌直接杀伤作用等防御机制在内的天然免疫是机体抵御曲霉感染的有力防线.
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慢性烟曲霉暴露对支气管哮喘大鼠气道黏蛋白MUC5AC表达的影响
[目的]探讨慢性烟曲霉暴露对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道黏蛋白MUC5AC表达的影响.[方法]将56只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为7组(每组8只):慢性哮喘(A)组、慢性哮喘+烟曲霉孢子吸入1周(B)、3周(C)和5周(D)组、慢性哮喘+生理盐水吸入(E)组、卵清白蛋白(OVA)致敏生理盐水激发(F)组和OVA致敏生理盐水激发+烟曲霉孢子吸入(G)组.测定各组大鼠基础气道阻力和应用乙酰胆碱后气道阻力变化率,RT-PCR测定肺组织MUC5AC mRNA的表达,免疫组织化学染色测定各组大鼠气道上皮细胞MUC5AC的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法测定BALF中IL-13水平,肺组织切片过碘酸雪夫染色(PAS)观察气道上皮杯状细胞增生程度.[结果]B、C和D组大鼠肺组织MUC5AC mRNA(MUC5AC mRNA/β-actin mRNA)(分别为1.9±0.4、2.3±0.6、2.9±0.8)、气道上皮细胞MUC5AC表达(A值)(分别为278±58、566±64、891±80)、BALF上清液IL-13[分别为(96±16)、(136±22)、(197±34)μg/L]及杯状细胞/上皮细胞面积(分别为16％±5％、23％±7％、36％±9％)均高于A、E、F及G组(均P＜0.05);C和D组大鼠气道阻力变化率(分别为61.91％±5.26％、84.69％±6.38％)均高于A、E、F及G组(均P＜0.05).B、C和D组哮喘大鼠MUC5AC的A值及MUC5AC Mma/β-actin mRNA与气道上皮杯状细胞增生程度(PAS染色区面积/上皮细胞面积)呈正相关(r值分别为0.578和0.614,均P＜0.05),与气道反应性(Raw变化率)呈正相关(r值分别为0.638和0.564,均P＜0.05).[结论]慢性烟曲霉暴露可上调哮喘大鼠气道上皮黏蛋白MUC5AC的表达,促进杯状细胞增生,加重气道高反应.
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真菌性角膜炎病原学及药敏结果分析
目的 探讨真菌性角膜炎病原学分布特点及药敏结果.方法 选择2006年1月-2016年12月医院眼科真菌性角膜炎200例作为研究对象,对200例患者眼角膜刮片标本进行真菌培养,行药敏检测.结果 200例真菌性角膜炎患者培养出221株病原真菌,以茄病镰刀菌、烟曲霉和光滑假丝酵母为主,分别为75株、23株和20株,分别占33.9％、10.4％、9.0％;75株茄病镰刀菌对伊曲康唑均不敏感,对伏立康唑敏感率为89.3％,对两性霉素B的敏感率为74.7％,对纳他霉素的敏感率为100.0％;23株烟曲霉对伊曲康唑、伏立康唑和纳他霉素的敏感率为100.0％,对两性霉素B的敏感率为52.2％;20株光滑假丝酵母对伊曲康唑、伏立康唑和纳他霉素的敏感率为100.0％,对两性霉素B的敏感率为85.0％.结论 真菌性角膜炎的主要病原菌为茄病镰刀菌、烟曲霉和光滑假丝酵母,临床应选择敏感抗菌药物加以治疗.
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烟曲霉生物被膜体外flowchamber模型成膜能力研究
目的：比较烟曲霉生物被膜（BF）在体外流动与静止模型中的成膜能力，获取较佳的体外研究模型，为烟曲霉今后的体外研究提供技术方法支持。方法分别建立烟曲霉生物被膜体外流动模型和静止模型，在生物被膜形成的不同阶段行 FITC‐Canavalia ensiformis （FITC‐ConA ）胞外基质（ECM ）染色，激光扫描共聚焦显微镜（CLSM ）观察烟曲霉生物被膜三维（3D）形态，COMSTAT软件定量分析3D图像堆，比较两种培养状态下生物被膜的生物量、平均厚度等生长指标。结果在静止模型和流动模型中，BF的生物量、平均厚度、基质覆盖率、平均扩散距离均随着培养时间的延长而升高，粗糙系数、表面积与生物量比随着培养时间的延长而降低；相同时间点下，静止模型组形成的BF的生物量、平均厚度、基质覆盖率、平均扩散距离较流动模型组的高，差异有统计学意义（P＜0．05）；静止模型组粗糙系数和表面积与生物量比较流动模型组的低，前者差异有统计学意义（P＜0．05），后者差异无统计学意义。结论烟曲霉在流动模型中亦可形成稳定的生物被膜，但静止模型可分泌更多的ECM ，形成更厚的生物被膜，更利于研究者对体外烟曲霉BF进行研究。
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烟曲霉的致病因子及作用机制的研究进展
早已认识到,真菌与宿主相互作用过程中可产生某些毒性因子或代谢产物,通过消弱机体的防御能力而促进感染的形成.近年来,烟曲霉(Aspergillus fumigatus)已成为临床上仅次于白色念珠菌的一种重要的条件致病真菌,其某些成分或毒素可直接造成机体损害,或降低机体防御能力而有利于曲毒感染形成或扩散,致侵袭性曲霉病,严重可危及生命.
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烟曲霉伊曲康唑耐药株的体外诱导及与CYP 51A基因相关性研究
目的：构建烟曲霉体外诱导伊曲康唑耐药株，初步探讨与CYP 51A基因的相关性。方法通过含有伊曲康唑的固体培养基对烟曲霉进行梯度浓度体外诱导耐药，微量液基稀释法测定诱导株对伊曲康唑的敏感性；提取诱导株基因组，扩增唑类药物靶酶CYP 51A基因，进行测序和序列分析。结果诱导获得8株烟曲霉体外诱导株，其中6株对伊曲康唑表现出耐药性。耐药株唑类药物靶酶CYP 51A基因发生G54(G54R, G54E)和L98H的点突变。结论伊曲康唑体外梯度浓度诱导是获得烟曲霉伊曲康唑耐药株的有效方法；烟曲霉对伊曲康唑抗真菌药物的耐药性可能与唑类药物靶点基因CYP 51A的点突变相关。
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烟曲霉引起侵袭型霉菌性鼻窦炎1例
患者女性,56岁.因左面颊疼痛15个月,左眼球向外突出、肿胀3个月,于1998年2月18日以"霉菌性上颌窦炎”入我院耳鼻喉科治疗.
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抗真菌药物研究进展
真菌病可分为浅表性真菌病、皮肤真菌病与系统性真菌病三大类,其中严重的真菌病为深部系统性真菌病.目前危害人类健康严重的3种致病真菌是烟曲霉、白色念珠菌和新型隐球菌.近年由于多种原因真菌感染尤其是深部真菌感染的发病率逐年上升[1].
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异绿原酸对烟曲霉生物被膜的体外作用
目的：探讨金银花活性成分异绿原酸对早期、成熟期烟曲霉生物被膜的体外作用。方法采用微量液基稀释法测定异绿原酸对受试烟曲霉菌株低抑菌浓度(MIC)和低杀菌浓度(MFC)；构建体外早期、成熟期静止生物被膜模型并用不同浓度(64、128、256、512、1024μg/mL)的异绿原酸组分别作用48 h，激光共聚焦显微镜(CLSM)检测生物被膜内存活菌；扫描电镜(SEM)观察生物被膜形态学改变；结晶紫染色法定量生物被膜。比较各组MIC和MFC。结果异绿原酸对受试烟曲霉菌株的MIC和MFC均大于1024μg/mL；不论早期或成熟期，空白对照组和异绿原酸各浓度组生物被膜内菌体在CLSM下均以绿色的活菌为主；电镜观察证实异绿原酸可破坏早期、成熟期的生物被膜结构，使胞外基质减少，菌体轮廓清晰；当异绿原酸浓度达到256μg/mL时，可以使载体上不同时期生物被膜的量明显降低，256、512、1024μg/mL异绿原酸组生物被膜定量与空白对照组及组间两两比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论异绿原酸在体外不能杀死烟曲霉生物被膜内菌体，但可对烟曲霉早期和成熟期生物被膜产生破坏作用，其作用呈浓度依赖性。
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不同中药单体成分对两性霉素B耐药的烟曲霉抑菌活性的体外研究
目的 研究4种中药单体成分对两性霉素B(AMB)耐药的烟曲霉菌的体外抗真菌效果,为进一步开发能抑制耐药烟曲霉的新药奠定研究基础.方法 采用微量液基稀释法测出肉桂醛、柠檬醛、绿原酸、黄芩苷对9株临床分离的耐药烟曲霉菌的低抑菌浓度(MIC)和低杀真菌浓度(MFC)进行实验.结果 肉桂醛对两性霉素B耐药的烟曲霉的MIC50、MIC90、MFC50和MFC90分别为128μg/ml、256μg/ml、256μg/ml和1 024μg/ml,柠檬醛对两性霉素B耐药的烟曲霉的MIC50、MIC90、MFC50和MFC90分别为256μg/ml、512μg/ml、512μg/ml和＞1 024μg/ml,绿原酸、黄芩苷对两性霉素B耐药的烟曲霉的MIC50、MIC90、MFC50 和MFC90均为＞1 024μg/ml.结论 肉桂醛、柠檬醛对AMB耐药的烟曲霉有抗真菌作用,绿原酸和黄芩苷在体外对AMB耐药的烟曲霉无抗真菌活性.
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烟曲霉毒力相关基因体内和体外表达的差异
近年来,由烟曲霉引起的侵袭性曲霉病(IA)在免疫受损患者中发病率显著增高.虽然新的抗真菌药物不断出现,该病的病死率仍高于50%[1].为寻找新的治疗靶点,近年来针对烟曲霉的毒力因子做了很多研究.目前已证实的毒力相关基因主要有pksP,fos-1, rhbA, pabA, lysF,cpcA 等[2],但这些基因在感染时表达情况的研究还很少.本研究拟应用竞争性定量的逆转录聚合酶链反应(competitive RT-PCR)检测这些基因体内和体外的表达情况,为进一步探讨毒力基因的作用机制奠定基础.
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肉桂醛和柠檬醛对黄曲霉及烟曲霉细胞DNA与RNA的影响
目的研究肉桂醛、柠檬醛对黄曲霉和烟曲霉细胞DNA、RNA水平的影响,以期探明其抗真菌的作用机制.方法黄曲霉、烟曲霉接种在含有不同浓度药物的蔡氏固体培养基中,同时设不加药物为空白对照,置26.5℃恒温培养3～6 d,将对照组和用药组真菌细胞进行激光扫描共聚焦显微镜观察并作细胞扫描图像分析,以对DNA、RNA进行定量和定位观察.结果用药组DNA、RNA水平发生不同变化,出现多核分生孢子.结论肉桂醛、柠檬醛直接或间接影响了真菌细胞遗传物质的正常合成,以至不能完成正常细胞周期,影响分生孢子梗的正常分化,从而抑制真菌生长、繁殖.
