首页 > 文献资料
-
加减温胆汤治疗变应性支气管肺曲菌病22例临床观察
变应性支气管肺曲菌病(allergc bropulmomry aspergilosis,ABPA)是指肺泡、肺间质和支气管对曲霉抗原(主要是烟曲霉Af)产生的变态反应性炎症,该病常发生于患有慢性哮喘或肺囊性纤维化患者,是嗜酸粒细胞肺炎中的一种.
-
Split-marker重组技术构建泛素C末端水解酶基因缺失菌株
目的:对烟曲霉(Aspergillus fumigatus)泛素末端水解酶(creB)基因进行敲除.方法:通过氨基酸序列分析软件初步分析烟曲霉CreB蛋白结构.利用split-marker重组技术构建重组片段,并通过PEG-原生质体方法对烟曲霉野生菌株进行转化,采用PCR方法对转化子进行筛选,后选取初步筛选的转化子进行测序鉴定.结果:结构分析显示烟曲霉CreB蛋白具有泛素特异蛋白酶(ubiquitin-processing protease)UBP亚家族六个结构域.本实验构建了转化片段并转化,在抗性平板中获得了25个Hyg抗性转化子,进一步采用PCR方法筛选到20个转化子,终通过测序分析获得一株creB基因缺失菌株.结论:Split-marker重组技术是对烟曲霉creB基因进行敲除的快速有效的方法.获得的creB缺失菌株可用于基因功能研究.
关键词： 烟曲霉 泛素C末端水解酶 Split-Marker重组技术 -
一株纤维素降解菌的分离、鉴定及产酶条件初步研究
目的:筛选具有纤维素降解能力的菌株.方法:在广州近郊自然环境取样,利用CMC固体平板筛选具有纤维素降解能力的茵株.结果:分离获得1株纤维素降解能力较强的菌株OY-01.该菌株适生长温度和pH分别为35℃和6.0-7.0.形态学观察、生理生化和28S rDNA序列分析表明该菌株属于烟曲霉(Aspergillus fumigatus).结论:菌株OY-01被鉴定为烟曲霉,其适产酶条件为:氮源为硫酸铵,浓度0.15%,温度为35℃,初始pH6.0-7.0,培养48-60h,Aspergillus fumigatus OY-01具有一定的工业应用潜力.
-
烟曲霉抗原及实验诊断的研究进展
烟曲霉是多种医源性因素导致的机会性、严重深部真菌感染的主要病原菌，烟曲霉病的早期诊断及防治是亟待解决的问题。目前，研究烟曲霉特异性抗原是发展早期诊断烟曲霉病方法的基础。
-
烟曲霉毒力因子的研究进展
本文综述了烟曲霉粘附因子、胞外蛋白酶、代谢酶、毒素分子等在侵袭性感染中的作用。同细菌相比，这种条件致病菌目前鉴定出的毒力因子还很少，利用分子遗传学新技术、新方法，改良、规范动物模型，可能有助于这方面研究的突破。
-
烟曲霉Aspf3和Aspf4线性B细胞抗原表位小基序鉴定
烟曲霉（Aspergillus fumigatus）是一种广泛存在于自然界中的条件致病菌，其产生的分生孢子被易感人群吸入后定植于肺部，引起3种曲霉病：致咯血的曲霉肿、致肺纤维化的变应性支气管肺曲霉病、致较高死亡率的侵袭性曲霉病。目前临床上用于诊断烟曲霉感染的血清免疫学指标有半乳甘露聚糖和1，3‐β‐D‐葡聚糖，但特异度和灵敏度方面存在一定的局限性。Asp f3和Asp f4为烟曲霉主要抗原，在感染者血清中存在相应的循环抗体。本研究分别用兔抗Asp f3和Asp f4抗血清对其进行抗原表位扫描，鉴定了8个Asp f3和6个Asp f4小表位基序肽。用所鉴定的小表位基序与烟曲霉其他抗原的小表位基序构建嵌合肽，可能有助于提高烟曲霉感染诊断的特异度和灵敏度。
-
内毒素耐受对核苷酸结合寡聚化结构域2信号通路的影响
为研究内毒素耐受对核苷酸结合寡聚化结构域2（nucleotide‐binding oligomerization domain containing 2，NOD2）信号通路的影响，将小鼠单核‐巨噬细胞RAW264．7分为两组，分别给予小剂量脂多糖（lipopolysaccharide ，LPS）（100 ng／mL）或磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline ，PBS）预处理20 h ，建立内毒素耐受组和对照组。每组细胞分别给予大剂量LPS（1000 ng／mL）或热灭活烟曲霉孢子刺激，于刺激后0、2、6、12、24 h采用定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction ，PCR）检测细胞NOD2、受体相互作用蛋白2（receptor‐interacting protein 2，RIP2）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α，TNF‐α）mRNA表达；采用酶联免疫吸附试验（enzyme‐linked immunosorbent assay ，ELISA ）检测细胞上清液中白细胞介素8（interleukin 8，IL‐8）和TNF‐α浓度。结果显示，内毒素耐受组无论是大剂量LPS还是热灭活烟曲霉孢子刺激均不能增加NOD2、RIP2和TNF‐αmRNA表达及细胞上清液中 IL‐8、TNF‐α浓度；而对照组大剂量 LPS和热灭活烟曲霉孢子刺激均可提高NOD2、RIP2和TNF‐α mRNA表达及细胞上清液中 IL‐8、TNF‐α浓度，尤以刺激后12 h增加显著，与刺激前（0 h）比较，差异有统计学意义（P＜0．05）。结果提示，内毒素耐受可能对NOD2信号通路有抑制作用。
关键词： 内毒素耐受 脂多糖 核苷酸结合寡聚化结构域2 烟曲霉 -
单核细胞抗烟曲霉感染作用的研究进展
烟曲霉是临床常见的机会性致病真菌,好发于免疫低下人群,常因吸入孢子导致肺部感染,治疗困难.烟曲霉的致病性与其较强的生存能力有关,但主要取决于宿主免疫状态,尤其是天然免疫功能.单核细胞是天然免疫的重要效应细胞,可分化为树突细胞和巨噬细胞.依据其表面分子分型,单核细胞功能上分别以吞噬抗原、呈递抗原和杀伤抗原为特点,在抗烟曲霉感染中具有较高的抵御能力和诊断价值.现阶段研究基于不断发展的荧光标记、灌流培养、光谱成像、基因敲除等技术,通过体外细胞实验和小鼠体内实验,观察到单核细胞与烟曲霉相互作用.在烟曲霉孢子入侵早期,单核细胞即启动基因表达,直接杀灭孢子,也可通过增强中性粒细胞杀孢子活性间接参与抗感染免疫调节,其中白细胞介素家族可能是关键信号分子.
-
树突状细胞相关受体在烟曲霉感染中作用的研究现况
烟曲霉是一种条件致病菌，一旦感染免疫抑制的患者，其病死率高达60%~80%。树突状细胞（DC）为专职的抗原递呈细胞，是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁，可通过不同的受体识别烟曲霉的孢子及菌丝，在吞噬病原菌后分泌相应的致炎因子并调节Th细胞的成熟和分化，进而有效地抵御烟曲霉的感染。因此，DC受体在这一过程中起着关键作用，文章将对DC相关受体在烟曲霉感染中作用的研究现况进行综述。
-
临床分离的携带TR34/L98H型的耐唑类药物烟曲霉的耐药机制分析
目的 对临床分离的耐唑类药物烟曲霉菌株进行耐药机制等相关研究.方法 自1例侵袭性曲霉病(IA)患者的肺泡灌洗液(BALF)中分离得到1株烟曲霉,采用美国临床实验室标准化协会(CLSI) M38-A2微量液基稀释法测定伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、两性霉素B和卡泊芬净对该菌株的低抑菌浓度(MIC)/低有效浓度(MEC),并对该菌株的唑类药物靶酶基因cyp51A进行克隆和序列测定分析,扩增并检测该菌株的9个微卫星标记位点,将其与国际上已经报告的具有相同耐药基因型的烟曲霉菌株进行非加权配对算术平均法(UPGMA)聚类分析.结果 伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、两性霉素B对该菌株的MIC分别为＞16、2、0.5和2μg/mL,卡泊芬净对该菌株的MEC为0.25 μg/mL.该菌株的cyp51A基因序列中存在启动子区-288～-322位间34 bp串联序列的插入,以及编码区T364A、T960A、T1554A的点突变,分别导致所编码蛋白98位、297位及495位氨基酸的置换(TR34/L98H/S297T/F495I).微卫星分析显示,该菌株的微卫星分型与先前欧洲国家、亚洲其他国家分离的TR34/L98H/S297T/F495I型菌株不同.结论 我们从1例IA患者BALF中分离到对唑类药物耐药的烟曲霉临床菌株,其耐药性是由cyp51A基因启动子区34 bp的串联序列插入结合基因编码区突变所致98位、297位及495位氨基酸置换(TR34/L98H/S297T/F495I)所介导,该菌株是中国所特有的、不同于国际上已描述的对唑类药物耐药的病原性烟曲霉.
-
深部真菌的耐药性及其耐药机制研究
本期“深部真菌的耐药性及耐药机制”专题汇集了4篇论著和1篇综述,阐述了白念珠菌、烟曲霉和新生隐球菌的耐药性及其耐药机制.随着抗真菌药物的大力应用,真菌的耐药性不断上升,研究真菌的耐药机制并探讨新抗真菌药物的作用靶点,可为新抗真菌药物研发和临床抗真菌治疗提供参考依据,这有着重要的临床意义.
-
提高侵袭性烟曲霉感染痰标本病原学检出率的方法探讨
目的:探讨一种可提高临床痰标本的侵袭性烟曲霉感染检出率的培养基.方法:收集临床常规痰标本分离菌(包括白假丝酵母菌),分析其耐药性,并将其作为"干扰菌"与烟曲霉标准株的孢子以不同比例混合接种培养,模拟痰标本的混合感染.观察彼此的干扰情况.同时添加抗菌药物于MediumB培养基中,分析培养基对烟曲霉的生长选择性.结果:当铜绿假单胞菌浓度≥104CFU/mL时,即可完全抑制烟曲霉(103CFU/mL)的生长:金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌则必须在>10<'5> CFU/mL时,才能完全抑制103 CFU/mL的烟曲霉生长:当白假丝酵母菌与烟曲霉以100:1混合接种时,其基本抑制了烟曲霉的生长.根据"干扰菌"的耐药特性,同时添加亚胺培南和万古霉素至培养基,结果显示其能有效抑制上述3种细菌的生长;添加氟康唑5μg/mL可抑制白假丝酵母菌的生长,而上述3种药物对烟曲霉的生长均无影响.结论:在所研究的真菌分离培养基中添加适宜的抗细菌及抗真菌药物,可有效抑制"干扰菌",提高烟曲霉的检出率.
-
绿原酸、异绿原酸对烟曲霉生物膜抑制作用的体外研究
目的：通过在体外复制烟曲霉的生物膜模型，研究绿原酸（chlorogenic acid，CRA）、异绿原酸（isochlorogenic acid， IRC）对生物膜的影响。方法选取临床分离的烟曲霉构建体外生物膜模型，微量液体稀释法测定低抑菌浓度（MIC），将菌株分为空白对照组、CRA实验组（1024 mg/L、512 mg/L、256 mg/L），IRC实验组（1000 mg/L、500 mg/L、250 mg/L），用扫描电子显微镜（scanning electron microscopy，SEM）、激光共聚焦扫描显微镜（laser confocal scanning microscope，CLSM）定性观察生物膜；结晶紫染色法半定量生物膜量。结果37℃培养24 h烟曲霉形成早期生物膜，48 h形成成熟期生物膜。SEM 及CLSM 观察到实验组烟曲霉生物膜均较其相应空白对照组空洞、稀疏，但菌丝未见明显减少，死活菌数也无明显差别。CRA、IRC实验组早期结晶紫半定量结果为1．05±0．19、1．14±0．26、0．99±0．14、1．39±0．06、1．41±0．06、1．60±0．04，均少于空白对照组1．91±0．17，差异具有统计学意义（P＜0．05）；CRA、IRC实验组晚期结晶紫半定量结果为2．25±0．05、2．27±0．05、2．31±0．03、2．26±0．02、2．27±0．02、2．29±0．04，少于空白对照组2．36±0．01，差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论CRA、IRC 对体外烟曲霉生物膜形成有抑制作用。
-
烟曲霉与人肺上皮细胞中E-cadherin相结合蛋白的初步研究
目的 烟曲霉是重要的条件致病真菌,可引起侵袭性肺曲霉病,而侵袭上皮细胞是烟曲霉致病的第一步.侵袭过程涉及的相关分子及其入侵机制尚不明确.上皮细胞的黏附分子E-cadherin可以和烟曲霉结合,并参与烟曲霉黏附侵袭上皮细胞的过程.本研究旨在探讨烟曲霉的致病机制,研究烟曲霉中和人肺泡上皮细胞黏附分子E-cadherin结合的蛋白.方法 通过生物信息学方法,以分子机制明确的李斯特菌中可以和E-cadherin结合的蛋白功能域为模板在烟曲霉中搜索,分析目标蛋白.通过免疫共沉淀来了解目标蛋白的大小,从而初步推测目标蛋白.结果 烟曲霉中与李斯特菌中可以和E-cadherin结合的蛋白功能域相似的序列为XP750927.1、XP750245.1、XP752100.1、XP748256.1;XP748256.1相对分子质量为45×103,而免疫共沉淀分析目标蛋白相对分子质量为50×103.结论 XP748256.1可能为烟曲霉中与E-cadherin结合的蛋白.
-
流式细胞仪检测胰蛋白酶对烟曲霉分生孢子表面纤连蛋白受体黏附力的影响
目的测定胰蛋白酶对真菌细胞活力的影响,探讨胰蛋白酶对烟曲霉分生孢子表面纤连蛋白受体的影响.方法用检测胰蛋白酶预处理20 min后烟曲霉分生孢子的活力,检测纤连蛋白与烟曲霉分生孢子的黏附率及胰蛋白酶处理后分生孢子与纤连蛋白的黏附率的变化,同时应用激光共聚焦显微镜观察分生孢子表面纤连蛋白受体的分布情况.结果胰蛋白酶预处理的分生孢子无凋亡峰出现,被干预的分生孢子接种于马铃薯培养基后仍有大量烟曲霉生长;分生孢子与纤连蛋白的黏附作用有特异性和饱和性;定量的纤连蛋白与被干预的分生孢子的黏附率随胰蛋白酶浓度的增加而降低;干预后分生孢子表面荧光标记的纤连蛋白受体分布下降.结论蛋白水解酶类可降解真菌细胞表面相关蛋白受体;流式细胞术可成为检测真菌细胞表面微观变化的高效辅助手段之一.
-
烟曲霉在支气管上皮细胞上形成生物被膜导致抗真菌药物敏感性下降
烟曲霉可能引起免疫缺陷宿主(如粒细胞减少的恶性肿瘤患者)侵袭性肺曲霉病,也是支气管哮喘和囊性肺纤维化患者的呼吸道常见定植菌.根据已有研究,某些细菌和酵母形成被膜,致使感染慢性化,并可能导致抗生素耐药.考虑到免疫缺陷宿主感染烟曲霉后的病死率较高,且体外药敏试验与临床疗效之间存在差异,我们推测烟曲霉能够在体内形成被膜.
-
烟曲霉对唑类抗真菌药物的耐药性
近年来,随着免疫抑制治疗、化疗、骨髓移植和实体器官移植的增加,侵袭性真菌感染的发病率也随之上升.对人类有致病作用的真菌主要有曲霉、念珠菌、新型隐球菌、毛霉等[1],在曲霉感染中以烟曲霉为常见[2].由烟曲霉引起的侵袭性曲霉病病死率高,已成为该类患者常见的死亡原因[3].根据2008年美国感染病协会(IDSA)公布的曲霉病治疗指南,对于侵袭性肺曲霉病,尤其是威胁生命的严重感染,首选伏立康唑;对于慢性空洞型肺曲霉病、变应性支气管肺曲霉病和变应性曲霉鼻窦炎应首选伊曲康唑[2].但随着唑类抗真菌药物的推广应用,曲霉对其耐药的报道逐渐增多,且烟曲霉对氟康唑和酮康唑呈现天然耐药[4].探讨其耐药机制对于防止耐药性的产生、寻找更有效的抗真菌药物具有重要意义.现就烟曲霉对唑类抗真菌药物(伊曲康唑、伏立康唑和泊沙康唑)的耐药机制进行综述,以期为临床抗烟曲霉治疗提供借鉴.
-
NOD相关蛋白在烟曲霉感染小鼠肺组织中的表达
目的:研究核苷酸结合寡聚化结构域(nucleotide-binding oligomerization domain,NOD)相关蛋白在烟曲霉(Af)感染小鼠肺组织中的表达.方法:通过经鼻气道滴入Af孢子的方法建立小鼠感染Af的模型,对照组小鼠经鼻气道内滴入等量的生理盐水.分别在不同时间点观察肺部Af负荷及病理学改变,采用RT-PCR方法检测各时间点的NOD1、NOD2及受体相互作用蛋白2(receptor-interacting protein 2,RIP2)mRNA在肺组织中的表达.结果:1)感染组小鼠肺部Af负荷24h达高峰,48h迅速下降.2)两组小鼠均表现为支气管周围炎症为主的病理改变,感染组小鼠24 h炎症细胞浸润显著,48 h炎症细胞浸润减轻.对照组小鼠病理损害明显轻于感染组.3)NOD1、NOD2、RIP2 mRNA表达在接种Af后12 h、24 h、48 h显著升高(P＜0.05).对照组各时间点NOD1、NOD2、RIP2 mRNA表达无显著差异.结论:NOD蛋白可能为Af的胞浆内模式识别受体(pattem recognition receptors,PRRs),在抗Af肺部感染的免疫反应中发挥一定作用.
关键词： 核苷酸结合寡聚化结构域蛋白 烟曲霉 小鼠 模式识别受体 -
烟曲霉SL-30菌株对非靶生物的安全性观察
目的 初步研究烟曲霉(A spergillus fumigatus)SL-30菌株对非靶生物的安全性. 方法 将烟曲霉SL-30菌株分生孢子分散于200 ml长江水、湖水、雨水和自来水中,孢子浓度为6×106 cfu/ml,每2天取样检测并记录孢子数.采用半静态法测定浓度为1 04、105和106 cfu/ml烟曲霉SL-30菌株分生孢子对斑马鱼(Brachydanio rerio)、日本沼虾(Macrobrachium nippoensis)和泽蛙(Rana limnochris)蝌蚪的影响,以去氯水作为对照,观察处理后30d内上述动物的存活情况,并计算存活率.测定烟曲霉SL-30菌株分生孢子对小鼠经口急性毒性、大鼠经皮和吸入急性毒性. 结果 烟曲霉SL-30菌株分生孢子在各供试水样中可存活约12d.当烟曲霉SL-30菌株分生孢子浓度分别为104、105和106 cfu/ml时,孢子浓度与实验动物存活率之间未见显著剂量依赖关系,且斑马鱼、日本沼虾和泽蛙蝌蚪的存活率与处理相同天数的对照组间的差异,无统计学意义(P＞0.05).烟曲霉SL-30菌株分生孢子对小鼠经口急性毒性、大鼠经皮和吸入急性毒性均属于低毒级,实验组动物均无明显中毒症状,大体解剖均未见明显异常,重要脏器的组织切片均未见明显病理改变. 结论 烟曲霉SL-30菌株对环境和非靶生物较安全.
-
烟曲霉对伊曲康唑耐药机制的研究现况
随着伊曲康唑等唑类抗真菌药的广泛使用,烟曲霉对其敏感度逐步降低,耐药性增强.对唑类抗真菌药作用机制的了解、体外敏感检验方法的标准化以及基因测序、RT-PCR等分子生物学方法的完善促进了对烟曲霉耐药机制的研究.烟曲霉耐药机制非常复杂,其中还有不少疑点尚待解决.本文主要针对烟曲霉对伊曲康唑的耐药机制进行综述.
