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人羊膜上皮细胞混悬液治疗兔急性角膜碱烧伤的实验研究
目的:结合体外细胞实验和在体动物实验研究羊膜上皮细胞(amnion epithelial cell,AEC)混悬液对兔角膜上皮细胞(cornea epithelial cell,CEC)生物学行为的影响及对急性角膜碱烧伤的治疗作用.方法:细胞实验:实验组将AEC及CEC于Transwell小室中培养,上室为AEC混悬液,下室接种CEC,对照组上室仅为培养基,于不同时间点行CCK-8法检测CEC的增殖活性;免疫细胞化学法检测PCNA表达;细胞划痕法观察细胞迁移能力.动物实验:采用改良的兔角膜碱烧伤模型制备方法:将10 mm直径环钻轻置于角膜中央,向环钻中央加入NaOH溶液,1 min后去环钻迅速冲洗兔眼,随机分三组(空白对照、AEC混悬液滴眼液治疗组、结膜下注射治疗组),于术后每周行裂隙灯显微镜及荧光素钠染色观察角膜情况.第28 d摘除眼球并固定行HE染色,免疫组织化学法检测角膜VEGF、mcp-1的表达.结果:CCK-8法示AEC混悬液作用后的CEC增殖活性增强(P<0.05);免疫细胞化学法显示PCNA阳性表达增强(P<0.05);划痕试验示AEC干预后CEC迁移加快.动物实验表明,滴眼液组和结膜下注射组的角膜恢复时间明显缩短,CNV面积均少于对照组(P<0.05),滴眼液组和结膜下注射组之间差异无统计学意义(P>0.05);HE染色示治疗组角膜组织炎症细胞浸润更少,组织排列更规则;免疫组化显示组织中VEGF、mcp-1表达更低(P<0.05),而滴眼液组和结膜下注射组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论:AEC混悬液促进CEC增殖和迁移,影响CEC生物学行为变化.经AEC混悬液点眼及结膜下注射治疗兔眼碱烧伤后角膜修复加快,且两种方法抑制炎症反应及CNV形成,有望成为治疗急性角膜碱烧伤的新方法.
