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LEDGFp52文献资料
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LEDGFp52-siRNA真核表达载体的构建和鉴定
目的:构建LEDGFp52基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体.方法:以LEDGFp52为靶基因,以pGenSil-1质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的LEDGFp52基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-1中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析.结果:经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功,重组质粒转染HeLa细胞48h,Western blotting检测到LEDGFp52蛋白表达的改变.结论:利用RNAi技术可成功构建抑制LEDGFp52表达的小干扰RNA重组体.
