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人牙髓干细胞与根尖牙乳头干细胞miRNAs表达谱的差异分析
目的: 比较人牙髓干细胞(Dental pulp stem cells,DPSCs) 与根尖牙乳头干细胞(Stem cells from the apical papilla, SCAPs) 中miRNAs 的差异表达情况.方法: 分离培养人DPSCs 和SCAPs,标记STRO-1 特异性抗体,利用免疫磁珠分选获得DPSCs 和SCAPs.进行成骨样和成脂样细胞诱导分化,用碱性磷酸酶(ALP) 、茜素红染色和油红O 染色的方法鉴定其分化能力.采用二代测序技术,检测DPSCs 和SCAPs 中miRNAs 的表达,筛选差异表达的miRNAs,运用生物信息学方法对差异表达miRNAs 进行靶基因预测和功能分析.结果: 与DPSCs 相比,SCAPs 中表达下调超过1. 5 倍的miRNAs 有7 个 (hsa-miR-224-5p、hsa-miR-1247-5p、hsa-miR-3065-3p、hsa-miR-452-5p、hsa-miR-767-5p、hsa-miR-4284、hsa-miR-146a-5p) ,无表达上调miRNAs.这些表达下调的miRNAs 所调控的下游靶基因主要有27 个,这些靶基因主要参与了细胞的迁移、分化和凋亡.结论: 特定miRNAs 表达的下调以及其所调控的下游靶基因可能与SCAPs 的干性维持相关.
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cAMP信号通路在根尖牙乳头干细胞定向分化中的作用
目的:探讨环磷酸腺苷(cAMP)信号通路对根尖牙乳头干细胞(SCAP)定向分化的影响.方法:酶消化法培养细胞;在矿化诱导液中分别加入信号通路激活剂Forskolin (FOR)和抑制剂H-89;通过茜素红染色和定量分析检测钙盐沉积;QPCR检测相关矿化基因mRNA的表达.结果:激活SCAPs内的cAMP信号后,该细胞茜素红染色增强,并上调矿化基因ALP、OCN、OSX、RUNX2的mRNA表达;而抑制SCAPs中cAMP信号后,该细胞茜素红染色减弱,并下调矿化基因的表达.结论:激活cAMP/PKA信号通路促进SCAPs分化,抑制信号通路则发挥相反作用,说明该信号通路对根尖牙乳头干细胞向成牙/成骨分化有一定的调节作用.
关键词： 根尖牙乳头干细胞(SCAPs) cAMP 分化
