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Trx-融合蛋白文献资料
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人Ⅰ型谷丙氨酸氨基转移酶的原核表达及抗血清的制备
目的:构建人谷丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫家兔,制备ALT1抗血清.方法:从HepG2细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增alt1基因,并将其克隆入pMD19-T载体中测序,将测序正确的目的基因克隆至PET-32a(+)表达载体中,并诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;所获得的包涵体蛋白经亲和层析纯化、透析复性、Western Blot鉴定后,免疫家兔制备抗血清,抗体效价和特异性分别采用ELISA,Western Blot进行检测.结果:测序证实克隆的基因序列与GenBank中的ALT1序列相符;SDS-PAGE,Western blot结果证实获得Mr为75×103的ALT1融合蛋白,其表达形式为不溶性包涵体;此包涵体蛋白经Ni2+亲和层析能有效纯化,以该蛋白免疫家兔制备抗血清,抗体效价为1:100 000,Western Blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合.结论:获得了ALT1重组蛋白及特异性多克隆抗体.
