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In-Cell Western检测细胞纤连蛋白
目的:利用In-Cell Western技术建立检测细胞纤连蛋白(cFN)的方法.方法:对微孔培养的成骨样细胞进行固定和封闭后,使用单克隆抗体对FN进行标记,经红外荧光二抗孵育后使用Odysssey系统对细胞进行扫描成像和数据分析.并在此基础之上优化了固定剂、通透化、封闭剂和一抗浓度.结果:免疫印迹法证实了In-Cell Western方法检测的特异性,当MG-63细胞密度低于90%汇合度(细胞数约1.6×104/孔)时,信号与细胞密度呈现较好的线性关系,低每孔4×103个MG-63细胞的cFN可被检出.结论:成功地建立了一种快速、经济且高通量的cFN检测方法并将其应用于细胞外基质研究.
