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模板指导的荧光素标记碱基掺入反应文献资料
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BRCA2基因突变荧光偏振检测方法的建立及优化
目的:建立一种适合于大量标本的基因突变筛查方法.方法:PCR扩增包含BRCA2基因突变位点的片段,经模板指导的荧光素标记碱基掺入反应(Template Directed Dye-terminator Incorporation,TDI),荧光素标记终止碱基(R110-acyGTp或TAMRA-acyTTP)特异性掺入到检测探针的3'末端,通过检测荧光偏振值(Flourscence Polarization,FP)确定BRCA2基因突变.结果:建立了基于TDI-FP原理的突变检测方法,并对引物、dNTPs浓度、PCR反应循环数等进行了优化,对健康人及乳腺癌患者外周血标本的检测结果与PCR产物直接测序法结果完全吻合.结论:此方法可快速、高通量检测BRCA2基因突变,适用于临床诊断和大量人群筛查.
关键词: 实验诊断学 BRCA2 荧光偏振 乳腺癌 模板指导的荧光素标记碱基掺入反应