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白喉毒素突变体(CRM9)文献资料
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CRM9与兔抗人IgG连接方法探讨
目的: 用直接偶联法构建新型蛋白兔抗人IgG-CRM9. 方法:分别应用异型双功能连接剂(m-Maleimidobenzoyl-N-hydoxysuccinimide ester, MBS)和N-琥珀酰亚胺3-(2-吡啶二巯基)丙酸盐(SPDP)将兔抗人IgG多抗和白喉毒素突变体(CRM9)进行连接,制备出新的蛋白.结合后的蛋白经Sephacryl S-300分离纯化,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳证明二者的结合情况. 采用酶联免疫法检测IgG与CRM9按不同比例反应后所构建的蛋白复合体中抗体部分的活性. 结果: 用MBS连接剂连接IgG与CRM9后的产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示出的条带明显滞后于IgG所显示的条带,而在琼脂糖凝胶电泳中IgG与CRM9混合反应的样品所显示的两条条带均与IgG和CRM9单独所在的条带一致.酶联免疫实验测得的各组A450 nm值表明,IgG与CRM9按1: 1和1: 3两种比例制备的样品对抗体活性影响小,而按1: 5和1: 8两种比例制备的蛋白,抗体活性受到很大的抑制. 结论: 兔抗人IgG与CRM9可以通过MBS结合,二者在1: 1～1: 3之间的比例时,可以有较好的连接,而且对抗体活性的影响小.SPDP则不适用于本实验中的两种蛋白的连接.这将为免疫毒素的新型连接提供有效的方法.
关键词： MBS 兔抗人IgG多抗 白喉毒素突变体(CRM9)
