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慢性脑缺血致认知功能障碍大鼠皮层ROCK2、MBS表达的变化
目的 探讨Rho激酶(ROCK)2及下游底物肌球蛋白结合亚单位(MBS)在慢性脑缺血致认知功能障碍大鼠皮层中的表达变化及法舒地尔对其的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠54只,随机分为假手术组、缺血组和ROCK抑制剂(法舒地尔)组.各组再根据缺血时间分为3、6、9 w三组,每组6只.采用双侧颈总动脉永久性结扎(2VO)建立慢性脑缺血模型,Morris水迷宫检测学习记忆功能,RT-PCR和Western印迹检测ROCK2及其下游作用底物MBS的表达水平.结果 与假手术组相比,模型组和法舒地尔组大鼠逃避潜伏期和游泳路径均明显延长(P＜0.05)；缺血3 w起,大鼠皮层ROCK2、MBS表达明显增高；法舒地尔干预后,大鼠逃避潜伏期和游泳距离缩短(大鼠学习记忆成绩不同程度改善),ROCK2、MBS表达水平均有不同程度降低,与模型组相比差异显著(P＜0.05).结论 ROCK2及其下游作用底物MBS参与大鼠慢性脑缺血致认知功能障碍,脑组织存在ROCK2表达上调与功能活化,ROCK抑制剂法舒地尔能够减轻神经功能损伤,从而改善学习记忆功能.
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脑梗塞大鼠脑组织中Rho激酶活性变化及其临床意义
目的:探讨脑梗塞过程中大脑组织中的Rho激酶活性变化,揭示其潜在的临床价值.方法:大鼠左侧颈内动脉内注射月桂酸钠,诱导同侧脑半球发生脑梗塞,建立大鼠脑梗塞模型.在注射月桂酸钠前及注射后0.5h,3h及6h四个时间点上各处死大鼠6只,取双侧大脑实质组织,用于组织匀浆提取蛋白,通过ELISA法检测大鼠大脑实质组织中Rho激酶的活性.另取6h组大鼠的大脑组织用免疫荧光染色法检测Rho激酶底物-MBS的磷酸化情况.结果:在注射月桂酸钠之后3h及6h,同侧大脑实质(即梗塞侧)内的Rho激酶活性明显高于对侧正常脑实质内的Rho激酶活性(P＜0.05),但在注射后0.5h内,双侧的Rho激酶活性无明显差异.结论:在大鼠脑梗塞模型中,大脑神经元内的Rho激酶活性能明显被活化,提示Rho激酶可能成为脑梗塞治疗的一个重要靶标.
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多囊卵巢综合征患者代谢综合征的患病率及临床特征
多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄妇女常见的内分泌疾病,胰岛素抵抗及代偿性的高胰岛素血症是PCOS重要的发病机制.对该病的远期研究认为PCOS患者易发生糖耐量异常、2型糖尿病、高血压、血酯异常和动脉粥样硬化,即代谢综合征(MBS)的表现.本文总结129例PCOS患者中MBS的发病情况.
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CRM9与兔抗人IgG连接方法探讨
目的: 用直接偶联法构建新型蛋白兔抗人IgG-CRM9. 方法:分别应用异型双功能连接剂(m-Maleimidobenzoyl-N-hydoxysuccinimide ester, MBS)和N-琥珀酰亚胺3-(2-吡啶二巯基)丙酸盐(SPDP)将兔抗人IgG多抗和白喉毒素突变体(CRM9)进行连接,制备出新的蛋白.结合后的蛋白经Sephacryl S-300分离纯化,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳证明二者的结合情况. 采用酶联免疫法检测IgG与CRM9按不同比例反应后所构建的蛋白复合体中抗体部分的活性. 结果: 用MBS连接剂连接IgG与CRM9后的产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示出的条带明显滞后于IgG所显示的条带,而在琼脂糖凝胶电泳中IgG与CRM9混合反应的样品所显示的两条条带均与IgG和CRM9单独所在的条带一致.酶联免疫实验测得的各组A450 nm值表明,IgG与CRM9按1: 1和1: 3两种比例制备的样品对抗体活性影响小,而按1: 5和1: 8两种比例制备的蛋白,抗体活性受到很大的抑制. 结论: 兔抗人IgG与CRM9可以通过MBS结合,二者在1: 1～1: 3之间的比例时,可以有较好的连接,而且对抗体活性的影响小.SPDP则不适用于本实验中的两种蛋白的连接.这将为免疫毒素的新型连接提供有效的方法.
关键词： MBS 兔抗人IgG多抗 白喉毒素突变体(CRM9)
