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呼吸道合胞病毒截断短F1蛋白文献资料
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人呼吸道合胞病毒截短F1重组蛋白包涵体的制备、纯化和复性
目的 将前期在大肠埃希杆菌中获得表达的A型人呼吸道合胞病毒兰州分离株截短的F1重组蛋白进行纯化和复性,为后期动物免疫制备抗原.方法 37℃诱导重组菌体pET-42b-F1J/Rossata,诱导完毕后离心收集菌体,高压破碎菌体并收集包涵体后用不同浓度的TritonX-100(细胞裂解液)洗涤包涵体3次.洗涤的包涵体用8 mol/L尿素进行溶解并用镍离子亲和层析方法进行初步纯化,用阳离子交换层析方法对初步纯化蛋白进行终的纯化.亲和层析纯化蛋白用3种不同的复性液进行了稀释复性.结果 37℃诱导5 000 mL重组菌pET-42b-F1J/Rossata共收获37 g湿菌体,经过不同浓度TritonX-100洗涤包涵体后纯度可达75％.包涵体用8 mol/L尿素溶解后经镍离子亲和层析纯化纯度约为40％,再用阳离子交换层析介质SP HP进一步纯化样品后纯度可达90％.纯化蛋白以3种不同的复性液都能得到复性,其中复性液3的复性效果相对较好.结论 实验中探索了人呼吸道合胞病毒截短F1重组蛋白包涵体的纯化方法及步骤,为后期的蛋白制备及动物免疫奠定了基础.
关键词： 呼吸道合胞病毒截断短F1蛋白 包涵体 纯化 复性
