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含单磷酰类酯A和QS-21的佐剂诱导强烈的抗乙肝表面抗原的免疫应答可维持四年之久
以重组乙肝表面抗原( HBsAg)为模型抗原,分别与三种不同的佐剂体系组合,即含有MP L和QS-21的水包油乳液( AS02 B 和 AS02 V )或脂质体(AS01B),进行细胞与体液免疫应答的持久性的评估。
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分子筛层析法分析重组乙肝表面抗原聚集物的形成
分子筛层析作为分析蛋白质颗粒聚集物的一种有力工具,被用于研究重组乙肝表面抗原聚集物的形成.已去除聚集物的表面抗原放置在不同的理化条件下或经过不同的纯化方法处理后,应用HPLC分析其聚集物的形成.为研究发酵过程中是否形成表面抗原聚集物,酵母细胞破碎后立即用Sepharose 4 FF层析柱分离为不同的组分,并分别进行HPLC分析.结果发现,在纯化过程和酵母发酵阶段都有表面抗原聚集物的产生.
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疏水层析用于大规模纯化重组HBsAg的工艺研究
应用疏水层析法从CHO细胞培养液中纯化HBsAg,每根制备柱每次可处理细胞收液350L,在适宣的上样流速和层析温度条件下,层析后可去除96%的杂蛋白,再经超速离心和凝胶过滤层析,可获HBsAg纯品.经检定,HPLC纯度高于95%,其余各项检定指标均符合<中国生物制品规程>要求.结果表明,此方法纯化效率高、处理样品量大、成本低,适于大规模生产.
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重组CHO细胞乙肝表面抗原诱导小鼠细胞免疫应答的研究
为了研究重组CHO细胞乙肝表面抗原(CHO-rHBsAg)在小鼠中诱导T细胞免疫应答的能力,全面评价疫苗的免疫原性,以CHO-rHBsAg免疫BALB/c小鼠,常规制备小鼠脾脏淋巴细胞并在体外以抗原或特异多肽刺激;采用ELISA法测定抗原特异性T淋巴细胞分泌的细胞因子,乳酸脱氢酶法(LDH)测定抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性,酶联斑点法(ELISPOT)测定CTL频数(CTLp),应用流式细胞仪分析T淋巴细胞亚群.结果显示,rHBsAg可在小鼠中诱导Th1及Th2类细胞因子;加铝佐剂的rHBsAg较未加佐剂的抗原可诱导较高水平的IFN-γ、CTL克隆及较高百分比的CD8+T淋巴细胞亚群.重组CHO细胞来源的HBsAg可在BALB/c小鼠中诱导一定程度的细胞免疫应答.