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细胞周期依赖激酶2重组慢病毒对内毒素致大鼠急性肺损伤的作用
目的 探讨细胞周期依赖激酶2(cdk2)重组慢病毒在内毒素(LPS)导致急性肺损伤(ALI)中的作用. 方法 36只成年SD大鼠按随机数字表法分为对照组、LPS模型组、基因干预组,每组12只.通过气管滴加LPS的方法成功复制大鼠LPS致ALI动物模型.对照组于伤后0,24,48 h气管滴加60 μl/kg等渗盐水;LPS模型组于伤后0,24 h气管滴加 60 μl/kg对照慢病毒,伤后48 h给予对照组同等体积的LPS等渗盐水;基因干预组于伤后0,24 h气管滴加60 μl/kg cdk2重组慢病毒,伤后48 h给予对照组同等体积的LPS等渗盐水.伤后24 h,取各组右肺下叶肺组织200 mg,HE染色观察肺组织病理变化;Western blot法检测组织cdk2、Clara细胞分泌蛋白(CCSP)、磷脂酶A2(PLA2)和磷酸化C/EBP β (p-C/EBP β)的蛋白表达;采集各组伤后24 h新鲜血液,ELISA法检测血液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10的含量. 结果 伤后24 h,与对照组比较,LPS模型组肺组织炎性浸润明显,肺泡组织结构损伤严重;与LPS模型组比较,基因干预组大鼠肺组织炎性浸润则明显减弱,肺泡结构趋于正常.基因干预组cdk2含量(4.29±0.73)明显高于对照组(1.00±0.21)和LPS模型组(0.93±0.17)(P<0.05);基因干预组CCSP表达量(3.19±0.38)明显高于对照组(1.00±0.20)及LPS模型组(0.32±0.19)(P<0.05);LPS模型组PLA2表达量(4.49±0.51)明显高于对照组(1.00±0.13)和基因干预组(1.76±0.26)(P<0.05);三组p-C/EBP β浓度变化趋势与CCSP相似.LPS模型组TNF-α表达量[(196.34±30.17)pg/ml]明显高于对照组[(71.24±5.13)pg/ml]和基因干预组[(86.32±11.02)pg/ml](P<0.05);三组IL-1β、IL-6、IL-10 变化趋势与TNF-α相似.结论 cdk2过表达可使CCSP蛋白表达增加,PLA2、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10表达减少,对于LPS导致的ALI起到肺保护作用,可能与调控C/EBP β磷酸化程相关.
关键词： CCAAT增强子结合蛋白β 磷酸化酶类 细胞周期依赖激酶2 内毒素类 急性肺损伤
