首页 > 文献资料
-
对无菌试验培养基灵敏度试验法准确性的初步研究
目的:研究<中国生物制品规程>(2000年版)(简称<规程>)中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法的准确性.方法:按照<规程>中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法,同时采用平皿[乙型溶血性链球菌采用血琼脂平皿,短芽孢杆菌采用营养琼脂平皿,生孢子梭状芽孢杆菌(简称生孢梭菌)采用硫乙醇酸盐软固体琼脂平皿(厌氧培养),白色念珠菌采用真菌培养基琼脂平皿]计数法,在相同稀释度及培养温度条件下平行进行1mL菌液的菌落形成单位(Colony Forming Units,CFU)计数.将菌液稀释至与标准比浊管相同之浓度,然后作10倍系列稀释.将稀释度为10-6～10-8的短芽孢杆菌、10-6～10-8的生孢梭菌,10-7～10-9的乙型溶血性链球菌菌液各1 mL,分别接种到9 mL硫乙醇酸盐培养基中;将稀释度为10-5～10-7的白色念珠菌菌液各1 mL,分别接种到9mL真菌培养基.每个稀释度至少接种3管,用未接种培养基作对照.将接种短芽孢杆菌的培养基,置35℃培养5 d,接种生孢梭菌或乙型溶血性链球菌的培养基,置35℃培养3 d,接种白色念珠菌的培养基,置25℃培养5 d,同时重复3次试验,记录结果.用每个菌种,按照需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法重复进行3次灵敏度试验.结果:按照<规程>中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法,同一种培养基,用同一质控菌种重复3次灵敏度试验,结果往往不同,尤其是用乙型溶血性链球菌进行质控时,更为明显.平皿CFU计数与比浊菌数常有显著差异.结论:<规程>中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法准确性欠佳.
-
对《硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查(草案)》的验证试验
目的:对新提出的<硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查(草案)>的准确性、可操作性和可重复性进行验证.方法:将质控菌乙型溶血性链球菌、生孢子梭状芽孢杆菌(简称生孢梭菌)、短芽孢杆菌接种于适宜的培养基培养,取新鲜培养物用0.9%无菌氯化钠制成浊度稍高于标准比浊管的均匀菌液,然后分别用0.9%无菌氯化钠溶液进行系列稀释至约相当于10-100CFU·mL-1,作为工作菌液.取上述工作菌液分别接种于3管(1 mL·管-1)硫乙醇酸盐流体培养基中,置35℃培养72 h(短芽孢杆菌培养5 d).同时将上述工作菌液进行CFU·mL-1计数:将乙型溶血性链球菌和短芽孢杆菌采用涂抹法分别接种于血琼脂培养基和营养琼脂培养基,置有氧条件35℃培养24h,生孢梭菌采用浇注法接种于生孢梭菌CFU计数培养基,置厌氧条件35℃培养18-20 h,用未接种的培养基作为空白对照.结果:当上述3种质控菌工作菌液的平皿CFU计数在10-100CFU·mL-1时,其接种的3管硫乙醇酸盐流体培养基均呈现生长.结论:新提出的<硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查(草案)>准确性、可操作性和重复性良好,易于推广和实施.可以提出作为对中国药典(2005年版)中硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查的修订草案.
