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5-二甲基-2-噻唑)-2文献资料
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纳米材料体外细胞毒性试验标准的关键项目研究
目的:参考ASTM标准,研究纳米材料体外细胞毒性检测方法(MTT试验和LDH试验)中的关键项目指标,为制定纳米材料体外细胞毒性试验标准提供实验依据.方法:通过全波长扫描获得MTT试验和LDH试验的检测波长;测试阳性对照品APAP的使用剂量和保存条件;通过改变MTT试剂的配制介质,以及DMSO溶解后加入和不加入甘氨酸缓冲液来测试MTT试验条件;考察含不同浓度血清(10％,5％,2.5％)的细胞培养液对LDH试验的背景影响;在确定优化的实验条件下用MTT试验和LDH试验,对某纳米银凝胶产品进行细胞毒性评价.结果:MTT试验和LDH试验在测定吸光度时双波长可分别设定为540～570/680 nm和490/680 nm.APAP作为阳性对照的合适浓度为20～30 mmol·L-1,该溶液保存条件为-20℃,14 d内有效.血清对LDH试验的干扰与浓度呈正相关,为确保细胞正常生长,该方法中血清浓度确定为10％,血清造成的背景值干扰可从空白组扣除.纳米银凝胶产品MTT试验和LDH试验结果(IC50)分别为26.8 mg·mL-1和61.8 mg·mL-1.结论:MTT试验和LDH试验相结合可以在1个实验体系内获得2个检测结果,能够更全面地评价纳米材料可能引起的细胞毒性.本课题确定了纳米材料体外细胞毒性检测方法(MTT试验和LDH试验)的关键项目指标,使该方法具有良好的操作性与可行性.
