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成像毛细管等电聚焦电泳测定单抗等电点的若干影响因素
目的:评价尿素、聚焦时间、pI标记物3个因素对成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)测定抗HER2单抗、抗VEGF单抗主峰等电点结果的影响.方法:应用iCIEF技术,通过添加尿素(2 mol· L-1),改变聚焦时间(6、8、10 min)和pI标记物的数量(2个/6个),对2种单抗制品主峰等电点进行测定.结果:抗HER2单抗使用6个pI标记物,添加终浓度2 mol·L-1的尿素,聚焦时间6、8、10 min,主峰等电点分别为9.01±0.00、9.02±0.01、9.06±0.01;使用6个pI标记物,不添加尿素,聚焦时间6、8、10 min,主峰等电点分别为9.07±0.01、9.08±0.01、9.09±0.01;使用2个pI标记物,主峰等电点范围为9.00～9.14(含尿素)、9.04～9.17(不合尿素).抗VEGF单抗使用6个pI标记物,添加终浓度2 mol· L-1的尿素,聚焦时间6、8、10 min,主峰等电点分别为8.32±0.00、8.35±0.00、8.35±0.07;使用6个pI标记物,不添加尿素,聚焦时间6、8、10 min,主峰等电点分别为8.39±0.01、8.39±0.02、8.41±0.01;使用2个pI标记物,主峰等电点范围为8.26～8.48(含尿素)、8.34～8.49(不合尿素).结论:使用iCIEF评价所选单抗等电点时,尿素、聚焦时间两因素对等电点的计算结果影响较小,pI标记物的选择对等电点的计算结果影响明显.
