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关键词:多重置换扩增(MDA)文献资料
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多重置换扩增(MDA)结合荧光PCR对植入前胚胎进行性别诊断的研究
目的:建立多重置换扩增(MDA)联合荧光PCR对植入前胚胎进行性别诊断的方法,为开展性连锁遗传病的性别筛选提供实验依据.方法:在行IVF-ET助孕的患者中,选取废弃的第3日新鲜或冷冻后的2PN受精胚胎.通过显微操作活检得到单个卵裂球细胞,采用MDA方法对单个/2个卵裂球细胞行全基因组扩增,然后采用荧光PCR方法对AMEL、X22、SRY和XHPRT4个性染色体相关基因或STR位点进行扩增,对其扩增产物行毛细管电泳检测,分析电泳结果确定植入前胚胎的性别.以父母的外周血单个淋巴细胞作为对照进行分析.结果:①采用蛋白酶K法(n=21)和碱法(n=17)对卵裂球细胞进行裂解行MDA,扩增成功率未见统计学差异(85.7％ vs 82.4％,P＞0.05)；单个卵裂球组(n=15)和2个卵裂球组(n=23)MDA扩增成功率亦未见统计学差异(80.0％ vs87.0％,P＞0.05).②利用MDA方法对15个胚胎的单个/2个卵裂球进行扩增,扩增成功率为86.7％(n=13). 13个胚胎中7个为男性,6个为女性,性别检测成功率100％；等位基因脱扣(alleledropout,ADO)发生率为7.7％.结论:PGD中MDA是有效且可靠的全基因组扩增方法,MDA结合荧光PCR可以用于性连锁遗传病的性别筛选、致病基因检测和对胚胎进行HLA分型.
