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  • 多巴胺D1受体在Sf9昆虫细胞中的表达及左旋氯代斯阔任对重组D1受体的激动作用

    作者:和友;金文桥;申庆祥;陈新建;金国章

    目的:在Sf9昆虫细胞中表达D1受体,并研究左旋氯代斯阔任对重组D1受体的激动作用.方法:构建含D1受体cDNA的重组杆状病毒,以其感染Sf9昆虫细胞得到D1受体表达.[3H]SCH23390受体结合检测重组D1受体的药理特性.[3H]SCH23390受体结合和cAMP测定实验检测左旋氯代斯阔任对重组D1受体的激动作用.结果:在Sf9昆虫细胞中成功表达D1受体,[3H]SCH23390与重组D1受体大结合量(Bmax)为(0.94±0.06)nmol/g蛋白,[3H]SCH23390与重组D1受体的结合解离常数(Kd)为(1.9±0.3)nmol/L,其药理特性与小牛纹状体脑匀浆所得结果一致.左旋氯代斯阔任对重组D1受体有高亲和力,解离常数Ki为(6.3±1.4)nmol/L;并剂量依赖地引起胞内cAMP增加,EC50为0.72μmol/L(95%可信限为0.67-0.77 μmol/L),表现出D1激动作用.结论:在杆状病毒/昆虫细胞Sf9中,成功建立了D1受体异源表达系统.在细胞分子水平,直接证实了左旋氯代斯阔任对D1受体的激动作用.

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