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重组链激酶粗提工艺研究
目的 研究重组链激酶得粗提工艺.方法 SKg基因采用PCR方法从G群β-溶血型链球菌基因中扩增获得,将此基因转至pBV220中形成pBV-SKg,再将其转到大肠杆菌中形成稳定的工程菌,经过增菌,破菌,粗提,纯化得到重组链激酶.粗品的量及纯度将影响重组链激酶收率,本文通过改变洗涤包涵体的尿素浓度,提高重组链激酶粗品的重量,从而提高了重组链激酶的收率.结果 重组链激酶菌体经洗涤,酶解,得到重组链激酶包涵体沉淀.将包涵体沉淀分别用不同浓度的尿素-TE洗涤、离心、收集沉淀,将沉淀做SDS-PAGE检测,结果1M尿素-TE洗涤效果较好,且包涵体重量高.结论 从SDS-PAGE检测结果上分析,1.0M尿素-TE洗涤的效果重组链激酶纯度和粗品重量更高一些,本试验的研究为提高重组链激酶的收率提供了实验依据.
