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胸苷激酶/丙氧鸟苷文献资料
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HSV1-TK自杀基因系统的构建及对肝癌细胞的体外杀伤效应
目的:构建表达单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV1-tk)基因的重组逆转录病毒,建立HSV1-TK/GCV肿瘤自杀基因治疗系统并检测其对肝癌细胞的体外杀伤效应.方法:将HSV1-tk cDNA定向克隆入逆转录病毒载体pLXSN,并用限制性内切酶进行酶切及测序鉴定; 用PolyFect Transfection试剂介导重组逆转录病毒转染入包装细胞系PT67,通过G418筛选建立稳定产病毒的细胞株,将病毒感染大鼠肝癌细胞CBRH7919,MTT法检测HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统在体外的抗肿瘤效应.结果:经酶切鉴定和DNA序列测定,证明HSV1-tk基因成功定向插入到pLXSN载体中;重组病毒DNA转染包装细胞PT67,获取病毒滴度为4×104cfu/mL的重组逆转录病毒培养液;感染大鼠肝癌细胞CBRH7919后再筛选出G418抗性克隆株CBRH7919/tk.经检测,导入tk基因的细胞对丙氧鸟苷(GCV)的敏感性大大增强,并显示出旁观者效应.结论:成功获取表达HSV1-tk基因的逆转录病毒,已建立显示出旁观者效应的自杀基因治疗系统,为进一步研究中医药对自杀基因抗肿瘤的增效作用奠定基础.
