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利用Excel制作体细胞EGFR21突变PYRO测序参考图
目的：EGFR突变对非小细胞肺癌患者能否使用络氨酸激酶抑制剂类药物密切关联，EGFR基因21号外显子主要有2种常见突变型，临床检测分析时一般很难分辨是何种突变型。探索利用Excel制作EGFR21突变焦磷酸测序法参考图,提高工作效率。方法假设细胞中EGFR外显子21发生突变的基因占20%，野生型占80%，将突变前后序列从2285号碱基按顺序录入并按比例依次赋值，Excel的图表功能可根据录入的数据自动描点生成相应的峰值模型图，经优化处理后可得到参考图。结果 EGFR21的野生型和突变型参考图可根据录入的数据自动生成，基因型全部为野生的样品，参考图中各碱基对应的峰值均为单倍或整数倍峰高，如果样品中含部分突变型基因，则参考图中碱基对应的峰值低于单倍峰高或非整倍数峰高或出现其他碱基峰，实验室工作人员可灵活应用它对检测结果进行基因分型判断，进而更加合理的指导临床用药。结论应用Excel制作EGFR21的参考图操作简单、快捷准确和灵活性，参考图可用于EGFR21焦磷酸测序检测结果的分型。
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焦磷酸测序分析表皮生长因子受体21号外显子基因突变方法的建立
目的 建立表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)21号外显子基因突变的焦磷酸测序方法.方法 用纯野生和纯突变的EGFR21质粒DNA按比例配制7份不同突变比例的DNA样本和1份正常人血液样本,对焦磷酸测序技术检测EGFR21基因突变方法进行验证,制备175例非小细胞肺癌标本gDNA,应用Qigene PyroMark Q24焦磷酸测序仪进行EGFR21基因的焦磷酸测序.结果 建立了可同时检测EGFR基因21号外显子L858R和L861Q突变的焦磷酸测序方法,175例非小细胞肺癌标本中共检测出EGFR21突变型样本29例,总突变率为16.57％(29/175),其中L858R突变占14.29％(25/175),L861Q突变占2.28％(4/175).结论 EGFR21基因突变的焦磷酸测序新方法具有快速、简便、灵敏度和准确度高的优点,特别适合于科研和临床批量检测的需要.
