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单核细胞激活实验在疫苗类生物制品热原检测中的应用研究
目的：研究人早幼粒白血病 HL-60单核细胞激活实验在疫苗类生物制品热原检测中的应用。方法：将 HL-60单核细胞分别与不同浓度热原（内毒素、酵母多糖和脂壁酸）标准品溶液、样品溶液进行孵育，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测孵育体系中 IL-6的含量。以热原标准品浓度为横坐标，IL-6量为纵坐标做标准曲线，将样品测得的 IL-6值代入该标准曲线，计算样品中热原的含量。选取处于标准曲线中间点的热原浓度，作为样品干扰试验中添加的热原浓度，参照《中国药典》细菌内毒素检查法中光度测定法中的干扰试验，用 HL-60/ IL-6单核细胞激活实验检测三种热原在流感疫苗、冻干甲型肝炎减毒活疫苗、冻干人用狂犬病疫苗、麻腮风联合减毒活疫苗、麻疹腮腺炎联合减毒活疫苗、双价肾综合征出血热灭活疫苗和 A 群 C 群脑膜炎球菌多糖疫苗7种疫苗中的回收率及其热原含量。结果：①不同浓度内毒素、酵母多糖和脂壁酸三种热原标准品刺激 HL-60细胞后，该细胞分泌 IL-6的量与热原浓度线性良好，R2分别为0．996，0．993，0．997。②该方法测定三种热原在以上7种疫苗中的回收率，回收率均在50％～200％之间。③以上方法测2个厂家10个批号 A 群 C 群脑膜炎疫苗中的内毒素含量，厂家 A 的6批样品内毒素平均值为134．73 EU·ml －1，厂家 B 的4批样品内毒素平均值为40．75 EU·ml－1。该方法检测其他6种疫苗中热原含量，结果均为阴性。结论：该方法适用于以上7种疫苗样品的热原检测。
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细菌内毒素检查法检测板蓝根注射液热原
细菌内毒素检查法在美国、欧洲、日本等国药典中广为应用,中国药典1995年正式收载了细菌内毒素检查法,该法以其所具有的特异、灵敏、简便、快速、重现性好等优点,正逐渐取代家兔法.但是,鲎试剂与内毒素的反应是一个十分复杂的酶促反应,易受到中药某些成份的干扰而出现假阳性或假阴性结果.是否能用于中药注射液的内毒素检查?我们在利用细菌内毒素检查法,对中药板蓝根注射液的热原检测作干扰实验,并与家兔法进行了对照,现报道如下.
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鲎试验法在解决输液反应问题中的应用
输液中引起热原反应.目前不少国家药典已逐步以鲎试验法(细菌内毒素检查法)取代家兔法作热原检测.在出现输液反应时,可以应用鲎试验进一步判明引起反应的原因,有的放矢采取措施,确保患者用药安全有效.现以我院工作实例报告如下.
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SPF家兔和普通家兔在热原实验中的比较研究
目的:将不同等级(普通级与SPF级)的家兔用于生物制品、细菌内毒素国家标准品的热原检测,研究普通级与SPF级家兔适应期对环境的适应能力、体温的均一性及对热原质的敏感性上是否存在差异,终选择出更适合于热原检测的等级家兔.方法:按照中国药典2005版三部附录ⅫD热原检查法,分别对SPF级与普通级家兔进行适应期与筛选实验的比较、对细菌内毒素(G-)的敏感性比较以及对生物制品热原检测准确性的比较.结果:适应期、筛选合格率、筛选实验体温分布情况及筛选实验体温波动情况比较存在显著性差异；对内毒素敏感性和同一制品热原检查无显著性差异.结论:SPF级家兔在适应期中的适应性优于普通级家兔；SPF级家兔筛选合格率优于普通级家兔；SPF级家兔与普通级家兔对内毒素敏感性无明显差异；SPF级家兔与普通级家兔对同一制品热原检查准确性无明显差异.
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兔全血法检测热原的可行性探讨
目的:研究体外兔全血法检测热原的可行性.方法:分别将细菌内毒素检查用水(阴性对照)、3种来源的热原质溶液[革兰氏阴性菌:细菌内毒素(0.0625,0.125,0.25,0.5,1.0 EU·mL-1)；真菌:酵母多糖(2.0 mg·mL-1)；革兰氏阳性菌:脂磷壁酸(0.5μg·mL-1)]加入兔全血,在CO2培养箱(37℃,5％CO2)内孵育8h,用酶联免疫分析法(ELISA)检测孵育体系中细胞因子(IL -6)的浓度,以IL -6浓度指示热原质的含量.结果:家兔热原检查法对细菌内毒素、酵母多糖及脂磷壁酸的低检测限为0.5 EU·mL-1、2.0 mg· mL-1及0.5μg·mL-1,体外兔全血法的低检测限均大于家兔法.结论:以细胞因子(IL -6)为检测指标,体外兔全血法不适用于热原质的检测.
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新的热原检测方法——细胞法介绍
现有热原检测方法存在的问题使研究新热原检测方法成为必要.近年来,许多新的热原检测方法已被研究和报道,它们主要以应用人源细胞在体外进行热原检测为基础.本文将围绕这些方法各自的特点和发展状况做扼要介绍.
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猪全血法体外检测热原的可行性研究
目的:研究猪全血法体外检测热原的可行性.方法:采用猪全血,与不同浓度的各类热原[细菌内毒素(LPS)、脂磷壁酸(LTA)、酵母多糖]共同孵育20 h(37℃、5％CO2),以细胞因子(IL-1β、IL-6)为检测指标,用酶联免疫法(ELISA)检测孵育体系中相应细胞因子的含量,进行猪全血-IL-1β、IL-6法体外热原检测的方法研究.结果:猪全血经一定比例稀释后(猪全血:RPMI1640为1∶3),猪全血-IL-1β、IL-6法对LPS可检测到0.25 EU·mL-1,对LTA可检测到0.5 μg· mL-1,对酵母多糖可检测到16.0 μg· mL-1;且在该孵育体系下,猪全血-IL-1β法对LPS的低检测限为0.125 EU·mL-1,线性范围为0.125 ～0.5 EU·mL-1,r =0.9515;猪全血-IL-6法对LPS的低检测为0.0625 EU·mL-1,线性范围为0.0625 ～0.5 EU·mL-1,r =0.9926.结论:初步研究认为,猪全血-IL-1β、IL-6法适用于检测热原.
