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淋病奈瑟菌NG-MAST基因分型方法的流行病学应用
目的 调查福建省三明市及泉州市淋病奈瑟菌基因型的分布状况,以获得更多的淋球菌的性传播网络信息.方法 收集2010-2012年三明、泉州淋病初诊者的共185株淋病奈瑟菌以及这些菌株的流行病学资料,用淋球菌多抗原序列分型法(NG-MAST)进行基因分型.结果 185株样本中有112个不同的ST型,其中51个为新型别,占45.54％,39个ST型包含2～8株淋球菌.12对性伴侣间ST型一致并且与流行病学资料调查显示的性接触史相符.对185株菌株进行系统树分析表明临床株可分为两大群,尚未呈现明显的地区聚集性,其中ST1766在澳大利亚和加拿大均已发现,反映了淋病的全球传播趋势.结论 NG-MAST分型法对传染源的追踪提供了一种补充方法,有可能在性伴背景资料不全的情况下构建淋球菌的传播网络.
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某三级医院四环素耐药淋病奈瑟菌临床分离株的耐药机制及分子特征
目的 对中国东部温州地区淋病奈瑟菌流行菌株进行分型,并对四环素耐药的相关机制进行研究.方法 从淋病患者中分离出77株淋病奈瑟菌,采用E-test法进行青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素、头孢曲松和阿奇霉素的小抑菌浓度(MIC)测定.PCR和DNA测序用于检测四环素抗性相关基因,包括Tet-M基因、mtrR启动子区和mtrR编码区.多抗原序列分型(NG-MAST)和多位点序列分型(MLST)分别用于确定所有临床分离株和四环素耐药分离株的分子特征.结果 在77株淋病奈瑟菌中,74株(96.10％)、27株(35.06％)、70株(90.91％)和15株(19.48％)分别对青霉素、四环素、环丙沙星和阿奇霉素耐药.所有测试的分离株对大观霉素和头孢曲松敏感.19株耐四环素菌株均存在Tet-M基因,其中17株mtrR启动区域发生1个碱基A的缺失突变,3株mtrR编码区域发生G45D突变.19株四环素耐药淋病奈瑟菌共测得11个不同的NG-MAST基因型,其中ST14781、ST1766和ST1866各占15.79％(均为3株),2个ST型(10.52％,2/19)未在NG-MAST数据库中报道过.19株四环素耐药淋病奈瑟菌共测序得到12个不同的MLST基因型别,其中ST10899占26.32％(5株),ST1600占15.79％(3株).结论 淋病奈瑟菌对四环素的耐药可能与mtrR启动区域和Tet-M基因的突变相关.NG-MAST基因分型结果显示温州地区淋球菌临床分离物表现出分子分型多样化.应采取措施监测温州地区具有高抗药性的NG-MAST ST1766和MLST ST1600淋病菌克隆.
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深圳市淋球菌阿奇霉素耐药的分子机制及流行特征分析
目的 了解深圳地区淋球菌临床分离株对阿奇霉素的耐药水平、分子机制及流行特征.方法 收集2011-2015年深圳市淋球菌临床分离株,采用琼脂稀释法和E-test法筛选出阿奇霉素耐药株(AZ-R, MIC≥1 μg/ml),将MIC≥2 μg/ml的耐药菌株以及随机抽取(SPSS17.0软件)的一定数量的敏感(MIC≤0.25 μg/ml)菌株(AZ-S)作为实验菌株进行耐药基因23S rRNA、mtrR、erm基因分析及淋球菌多抗原序列分型(NG-MAST).结果 共收集到788株淋球菌,AZ-R菌株有148株,耐药率为18.8%(148/788).高水平阿奇霉素耐药菌株(AZ-HLR,21株)中有18株23S rRNA基因发生错义突变,均为4个等位基因的A2059G突变.中等水平阿奇霉素耐药菌株(AZ-MLR,29株)中有12株23S rRNA基因发生错义突变,其中主要为C2611T在4个等位基因中的全部突变(10株).对mtrR启动子和编码区的突变分析,仅发现G45D/Y105H突变在AZ-HLR组中所占比例高于AZ-MLR组(χ2=12.702,P=0.000)和AZ-S组(χ2=4.462,P=0.035).发现1株菌株携带有ermB基因(MIC值为2 μg/ml).NG-MAST分型,共得到了81个ST型别,其中大部分ST型别由单一菌株构成,AZ-R组8个成簇的ST型别中ST1866、ST3356分别被国内城市南京、重庆、广州报道过,Neighbor-joining建树未观察到耐药株单独成簇的情况.结论 目前深圳地区已不适用于单独采用阿奇霉素治疗淋病.淋球菌对阿奇霉素的高度耐药和中等水平耐药主要由23S rRNA 上A2059G和C2611T突变分别介导.多地报道出现的ST1866和ST3356有助于我们更好地对阿奇霉素耐药淋球菌菌株的流行特征进行监测和分析.
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性伴间淋球菌的opa分型及Ng-MAST基因分型
目的 评价淋球菌opa分型及Ng-MAST对淋球菌分离株进行基因分型的能力,分析性伴分离淋球菌基因型别之间的关系.方法 本研究中24株淋球菌野生株于2006年2月至2007年8月从华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科门诊分离获得,经Thayer Martin(T-M)培养基选择分离培养后通过革兰染色和氧化酶试验等方法确证.PCR扩增其opa基因以Hpa Ⅱ酶切及聚丙烯酰胺凝胶电泳银染显色分析,并用NG-MAST方法从分子水平上进行基因分型.结果 24株野生株淋球菌中,Ng-MAST区分出10种ST型,而使用opa分型则呈现12种OT型;新发现的ST(217-86%同源178)是国内特有的流行株.结论 淋病患者一性伴组除了45/46之外,每对菌株的ST型及OT型均相同,表明患者与性伴相互接触传染.淋球菌opa分型能力高于Ng-MAST,ST型别可进一步的分成opa*types(OT)亚型.
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淋球菌对头孢曲松的敏感性及淋球菌多抗原测序分型研究
目的 了解中国广东地区2010-2016年淋球菌对头孢曲松的敏感性以及相应菌株的淋球菌多抗原测序分型(NG-MAST)基因型别.方法 2010-2016年在广东省疾病预防控制中心收集的285株淋球菌,经分离纯化及鉴定后,采用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的琼脂稀释法测定其对头孢曲松的小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);菌株培养后利用试剂盒提取DNA,并进行淋球菌多抗原测序分型(NG-MAST).结果 本次测试的285株淋球菌除1株MIC＞0.25μg/mL外,其他都属于敏感菌株(CLSI敏感标准为≤0.25μg/mL),MIC≥0.06μg/mL的菌株比例为63.2％,其中2016年度MIC≥0.06μg/mL菌株比例为44.4％,2010年MIC≥0.06μg/mL菌株比例为70.6％.NG-MAST分型研究显示,285株淋球菌共有166个型别,菌株多样性较高,其中73种为已知型别,93种为新型别.测定的所有菌株中主要包括ST568(n=13),ST270(n=9),ST421(n=7),ST2288(n=5),ST173 1(n=4),ST 1766(n=4),ST 1866(n=4),ST1870(n=4),ST1053(n=4),ST2318(n=4),ST5990(n=4),ST1614(n=4),ST1866(n=3)等.相同NG-MAST型别的菌株具有相同或相近的MIC值.结论 广东地区淋球菌对头孢曲松MIC≥0.06μg/mL菌株比例较高,需要对此进行长期监测.7年间菌株的优势型别有较大变化,显示该地区性网络可能发生较大波动.NG-MAST分型可以作为分子生物学标记用于淋球菌耐药监测.
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淋病奈瑟菌的耐药性及分子流行病学观察
目的 探讨临床分离的淋病奈瑟菌(淋球菌)对常用抗菌药物的耐药性及分子流行特征.方法 收集2015-2016年本院临床分离的淋球菌,采用琼脂稀释法检测青霉素、四环素、大观霉素、环丙沙星、头孢曲松、头孢克肟、阿奇霉素的小抑茵浓度(MIC),头孢噻吩纸片法检测产青霉素酶淋球菌(PPNG),淋球菌多抗原序列(NG-MAST)确定菌株的ST.结果 共分离出126株淋球菌,对抗生素的耐药率依次为环丙沙星(100.00％)、青霉素(73.02％)、四环素(65.08％)、阿奇霉素(21.43％),检出17.46％ (22/126)的阿奇霉素高水平耐药(AZ-HLR)(MIC≥256mg/L)菌株,未发现耐大观霉素、头孢曲松、头孢克肟的淋球菌.57.14％(72/126)的菌株为PPNG.NG-MAST分型结果显示,126株淋球菌分为82种不同的STs型别,其中ST1866(6.35％)、ST1927(5.56％)、ST3102(5.56％)是主要ST型,没有明显优势的ST型别.结论 本地区分离的淋球菌存在遗传背景的多样性;阿奇霉素耐药性较高,且发现AZ-HLR菌株,不适合单独治疗淋球菌感染;头孢曲松和大观霉素仍可作为淋病抗感染的一线药物.
