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河南省信阳地区鼠类感染立克次体的调查
目的 了解河南省信阳疫区鼠类中恙虫病东方体、斑点热及斑疹伤寒立克次体感染状况.方法 采用巢式聚合酶链反应(nested-PCR),对信阳市淮滨县捕获的家鼠肝、脾、肾、血液标本进行扩增恙虫病东方体、斑点热群及斑疹伤寒群立克次体热休克蛋白(groEL)基因并测序分析.采用间接免疫荧光方法(IFA)对家鼠血清标本进行斑疹伤寒病原体、恙虫病东方体特异抗体检测.结果 共捕获鼠62只,其中内脏标本中检出恙虫病东方体10份(16.13%),斑疹伤寒立克次体5份(8.06%),斑点热群立克次体4份(6.45%);血液标本中检出恙虫病东方体5份(8.06%),斑疹伤寒群立克次体4份(6.45%),斑点热群立克次体1份(1.61%).有5份标本同时检出恙虫病和斑疹伤寒,复合感染率为8.06%.在鼠内脏标本中检测到2株蚤传斑点热病原体R.felis.用IFA检测26份鼠血清抗体,3份恙虫病阳性(11.5%).结论 信阳地区啮齿动物宿主鼠类标本中检测出恙虫病东方体、斑点热群和斑疹伤寒群立克次体,存在复合带菌状况,鼠血清恙虫病东方体特异抗体流行率较高.
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分子生物学方法在儿童流行性感冒监测中的应用
目的建立一种能够快速、特异、有效地直接从临床标本中检测流行性感冒(流感)病毒并进行病毒型和亚型鉴别的方法,同时了解近年来北京地区A3型流感病毒血凝素重链(HA1)区基因的变异特点.方法根据编码A、B型流感病毒膜蛋白M基因的核苷酸序列设计两对引物,用于同一逆转录(RT)-PCR反应中(多重RT-PCR),根据A、B型毒株扩增产物的大小(分别为506 bp和261 bp)鉴别A、B型流感病毒.另根据编码A1和A3型流感病毒糖蛋白HA基因的核苷酸序列设计两对引物,与B型M基因引物用于同一RT-PCR反应中,可区分A1、A3或B型流感病毒(扩增产物分别为944 bp、1 072 bp和261 bp).为提高检测临床标本的敏感性,针对A1和A3型病毒HA基因和B型病毒M基因又设计了3对引物作为外侧引物,进行巢式-PCR反应.根据第二次PCR的扩增产物在1.2%的琼脂糖凝胶电泳中的大小即可确定型别.经PCR扩增1996～2002年间分离的北京地区A3型流感病毒株HA1区基因,测序并进行序列分析.结果用上述多重RT-PCR鉴定流感病毒分离株156株,与血凝抑制试验阳性符合率为100%.用多重巢式-PCR检测92份已经病毒分离确定为流感的儿科临床呼吸道标本,与病毒分离和血凝抑制试验阳性符合率分别为76.9%(A1型)、57.1%(A3型)、86.5%(B型).对5株1996～2002年间A3型分离株HA1区基因序列分析结果显示,不同年份的分离株HA1区基因具有较高的核苷酸和氨基酸同源性,而且年份越近的毒株之间同源性越高.结论多重RT-PCR和巢式-PCR可同时检测不同型别的流感病毒,并可直接对临床标本进行检测,为流感监测提供更加快速的新方法.北京地区A3型流感病毒分离株HA1区基因持续不断地发生点突变,糖基化位点不断增多,可能是导致其抗原漂移的原因.
关键词： 流感病毒 多重逆转录-聚合酶链反应 巢式-聚合酶链反应 序列分析 -
应用全基因组扩增技术对β-地中海贫血进行胚胎植入前遗传学诊断
目的探讨对β-地中海贫血进行胚胎植入前遗传学诊断的方法.方法夫妇双方分别为β41-42(-TCTT)及IVS-Ⅱ 654(C→T) 突变杂合子,在本中心进行体外受精-胚胎移植和胚胎植入前遗传学诊断.结果 13个胚胎中共有11个胚胎经PCR分析后获得明确诊断,正常胚胎2个(18.1%);杂合子胚胎6个(54.5%);双重杂合子胚胎3个(27.3%).共移植3个胚胎,其中2个正常胚胎、1个杂合子胚胎.在胚胎移植后5周 B超示三胎妊娠,孕8周自然减一胎,并于孕20周时经产前诊断,证实均为健康胎儿.现已分娩双胎分别为正常和杂合子.结论成功应用全基因组扩增技术对β-地中海贫血进行胚胎植入前遗传学诊断,并分娩健康双胎.
