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诱导子对野罂粟悬浮培养细胞中活性生物碱产生的作用考察
研究了真菌诱导子和金属诱导子对野罂粟培养细胞中生物碱(野罂粟碱和黑龙辛甲醚)产生的影响.在野罂粟悬浮培养细胞中加入真菌和金属诱导子以考察其对细胞生长和野罂粟生物碱产生的作用,并利用HPLC法测定了培养物中野罂粟碱和黑龙辛甲醚的含量.结果显示密环菌诱导子可使黑龙辛甲醚的含量达0.026 mg/g,野罂粟碱的含量由0.0159提高到0.0178 mg/g;灰葡萄孢菌可使黑龙辛甲醚含量达0.0346 mg/g;Zn2++和Cu2+可使黑龙辛甲醚的含量由0.0252 mg/g分别提高到0.0282和0).0395 mg/g.本研究表明,添加适量的真菌和金属诱导子可使野罂粟碱和黑龙辛甲醚的含量有不同程度的提高.
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白花蛇舌草细胞悬浮培养的建立与条件优化
目的 利用白花蛇舌草茎尖的愈伤组织建立细胞悬浮培养系,并通过实验研究不同条件对白花蛇舌草细胞悬浮培养细胞生长的影响.方法 采用单因素试验对不同种类、不同浓度的激素及其组合、碳源的种类以及碳源浓度、起始的pH值对白花蛇舌草细胞悬浮培养细胞生长的影响作用进行研究.结果 适pH=6.5,激素以NAA效果好,其中NAA佳浓度为1.5mg·L-1.组合激素对细胞的生长的促进作用和单种激素相比,没有明显增强.蔗糖比葡萄糖更适合作为碳源,蔗糖的佳浓度为30g·L-1.结论 本试验建立了白花蛇舌草的细胞悬浮培养系,提出了培养的优条件,可以用以大量生产.
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活性炭对红豆杉细胞褐变的抑制
本文研究了活性炭对红豆杉细胞悬浮培养褐变的抑制,优化出活性炭培养基,确定了活性炭加入的佳时间为对数生长期,并与另一种吸附剂PVP进行了比较,结果表明:活性炭主要是通过吸附细胞分泌到细胞外的有害代谢产物而发生作用的.
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小鼠肌源性干细胞悬浮培养的可行性
目的 探讨悬浮培养获取小鼠肌源性干细胞(MDSC)的可行性.方法 分离2周龄C57BL/6小鼠肌肉组织,采用悬浮培养法培养MDSC.分别于培养前(pp0)、培养2 h(pp1)及之后每24 h(共5次,分别标记为pp2、pp3、pp4、pp5和pp6)显微镜下观察悬浮细胞形态并计数.收集pp2～pp6时段含悬浮细胞的培养上清液,流式细胞仪检测CD34、抗干细胞抗原1(Sca-1)表达并计算其阳性细胞所占比例.取pp6时段MDSC,采用施万细胞诱导7天,观察细胞形态变化,免疫荧光检测细胞p75 NGF表达;另取pp6时段MDSC,进行成骨细胞诱导,观察细胞形态变化,并行茜素红染色.结果 镜下观察显示,随培养时间延长,悬浮细胞数量逐渐增多,细胞呈小球形,单个或成团,表面光滑,折光率高.pp2、pp3、pp4、pp5和pp6时段悬浮细胞数量分别为(2.64±0.20)×105、(3.08±0.19)×105、(3.63±0.13)×105、(4.64±0.15)×105、(6.06±0.26)×105个,各时段悬浮细胞数量两两比较P均<0.05.CD34+、Sca-1+、CD34++Sca-1+细胞所占比例随培养时间延长均逐渐增加(P均<0.05).施万细胞诱导培养7天,光镜下可见小球形、高折光率细胞逐渐分化为长条形、串珠样类施万细胞,部分细胞死亡,部分仍保持小球形;免疫荧光显示,约90％诱导细胞p75 NGF受体反应阳性.成骨诱导培养21天,光镜下可见小球形折光率高的细胞大量分化为长条形细胞,部分显示片状,有晶体形成.茜素红染色大部分红染,并可见棕褐色结晶状矿化结节形成.结论 悬浮培养法可获取初始细胞量约3倍的小鼠MDSC,且培养获得细胞具有良好的成神经、成骨分化能力.
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前体饲喂和真菌诱导子对肉苁蓉悬浮培养细胞次生代谢产物的影响
目的:研究前体饲喂和真菌诱导子对肉苁蓉悬浮培养细胞生长、苯乙醇总苷(PeGs)和松果菊苷(Echin)含量的影响.方法:悬浮培养联合加入前体和真菌诱导子.结果:前体化合物L-苯丙氨酸+L-酪氨酸与番茄霉菌联合作用,肉苁蓉悬浮细胞干重、PeGs及Echin含量均达到大值,分别为14.69 g DW/L、50.55 mg/g和23.86 mg/g,是对照的1.81、4.18和3.99倍.结论:前体和诱导子联合作用能显著提高肉苁蓉细胞悬浮培养体系中次生代谢物的含量.
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贯叶金丝桃的细胞培养
从贯叶金丝桃叶和嫩茎诱导愈伤组织的过程,探讨了悬浮培养和平板培养的方法,以及细胞悬浮培养时间、培养方法和接种密集度对贯叶金丝桃单细胞平板培养植板率的影响.在所实验的MS、B5、White3种培养基中,以MS培养基较好,其中MS+2,4-Dl mg/L+NAA 1 mg/L培养基愈伤组织诱导率为92.86%.细胞悬浮培养以B5培养基较好.普通单细胞平板培养法培养贯叶金丝桃单细胞的植板率很低,而以悬浮培养14～21 d的单细胞为材料,接种密度5×103/ml时,进行条件培养和看护培养,植板率达11.62%.
