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有机磷农药对星形胶质细胞的影响
有机磷农药是我国生产和使用多的农药,对神经的损伤是有机磷农药中毒患者致死的主要原因.研究表明星形胶质细胞可能是有机磷农药除乙酰胆碱酯酶之外的作用靶点.有机磷农药能够激活星形胶质细胞,反应性胶质化在有机磷农药的神经毒性中具有两面性,研究者们更倾向于认为它对有机磷农药神经毒性的保护作用.
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P2X7受体在原代培养星形胶质细胞生长中的作用
目的 探讨ATP是否促进原代培养的星形胶质细胞(astrocytes,As)发生类似反应性星形胶质化的变化以及嘌呤类受体P2X7在该过程中的作用.方法 原代As的分离和培养;实时照相观察As形态变化;用BrdU掺入法及流式细胞观察As增殖变化;用荧光标记实时定量PCR(real-time RT-PCR)检测GFAP mRNA,P2X7 mRNA,TGF-β1 mRNA表达的变化;用Western blot检测GFAP 表达; ELISA检测培养上清中TGF-β1的变化.结果 成功分离并培养原代As,免疫荧光鉴定阳性率为99%.不同浓度ATP(50 μmol/L,100 μmol/L,500 μmol/L)作用于As,均可使之表现出类似反应性胶质化的形态改变,表现为胞浆丰富,细胞突起增加且更为明显.ATP 100 μmol/L作用1 d后,As 的S期细胞数目明显增加,提示细胞增殖的活跃,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,5-BrdU)掺入法显示细胞核阳性率明显增加.500 μmol/L 浓度的ATP能促进As的 GFAP mRNA,P2X7 mRNA表达.用P2X7特异性的受体激动剂2′-3′-O-(4-benzoylbenzoyl)-adenosine-5′-triphosphate (BzATP) 50 μmol/L,75 μmol/L,100 μmol/L作用于原代培养的As,在培养基有Ca2+情况下可明显促进GFAP表达.在培养基有Ca2+的情况下BzATP作用2 h及12 h时As中TGF-β1 mRNA升高.培养上清中TGF-β1蛋白的含量在8 h 及48 h 均有升高.TGF-β1中和抗体能部分抑制P2X7引起的As GFAP含量的增加.结论 100 μmol/L的ATP可以促进As增殖.各种浓度ATP均可促进As形态产生类似胶质化反应的变化.P2X7特异性受体激动剂BzATP可引发胶质化样反应,并且在有Ca2+的情况下促进TGF-β1的转录和释放.TGF-β1参与了P2X7受体诱导的类似反应性星形胶质化过程.
关键词： ATP 原代培养星形胶质细胞 反应性星形胶质化 P2X7受体 TGF-β1 -
腺苷类物质及其受体在反应性星形胶质化过程中的作用
反应性星形胶质化是各类脑损伤后的修复过程,但过度的胶质化会成为中枢神经突起再生的障碍.腺苷及其类似物作为神经递质对反应性星形胶质化有明显的影响,ATP及腺苷可通过各自的受体来促进或抑制星形胶质化腺苷受体P2X7,P2Y在星形胶质化的调节中起重要作用.对调节胶质化的信号通路的研究可为临床合理控制胶质化反应、促进神经功能的恢复提供新的思路.
