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青蒿琥酯对MRL/lpr小鼠间质性肺炎和颌下腺炎的治疗作用
目的 探讨青蒿琥酯对MRL/lpr小鼠间质性肺炎和颌下腺炎的治疗作用.方法 18只MRL/lpr小鼠按随机数字表法分为硫酸羟氯喹组、青蒿琥酯组和对照组,每组6只.18周龄时,硫酸羟氯喹组和青蒿琥酯组分别给予硫酸羟氯喹混悬液(150 mg/kg,1次/d)和青蒿琥酯混悬液(50 mg/kg,1次/d),共12周.HE染色法评价肺炎和颌下腺炎的病理学改变.采用酶联免疫吸附法检测血清和尿单核细胞趋化蛋白-1 (monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)水平.结果 30周龄时,硫酸羟氯喹组、青蒿琥酯组细支气管周围损害指数[(1.62±0.19)、(1.52±0.30)比(1.95±0.34);P＜0.05]、血管周围损害指数[(1.23±0.18)、(1.28±0.12)比(1.57±0.33);P＜0.05]、肺泡损害指数[(1.35±0.16)、(1.37±0.10)比(1.72±0.34);P＜0.05]、颌下腺炎症指数[(1.48±0.22)、(1.43±0.15)比(1.84±0.34);P＜0.05]均较对照组减轻,血清[(1 103.02±185.56) pg/ml、(1 072.37±242.43) pg/ml比(1 490.67±329.43) pg/ml;P＜0.05]和尿[(189.16±70.85) pg/ml、(198.79±113.47) pg/ml比(446.79±192.31) pg/ml;P＜ 0.05] MCP-1水平均显著降低.结论 青蒿琥酯可降低MRL/lpr小鼠血清MCP-1水平,减轻间质性肺炎和下颌腺炎.
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凉血化瘀解毒法对MRL/lpr 鼠相关细胞因子表达的影响
目的 观察凉血化瘀解毒法对MRL /lpr 鼠相关细胞因子表达的影响,探讨系统性红斑狼疮(SLE)发病中瘀热将MRL /lpr 鼠分为模型组、阴性组、中药组、西药组、中西药组,中药组予凉血化瘀解毒复方,西药组给予强的松加环磷酰胺,观察MRL /lpr 鼠血清中抗ds-DNA 、抗核小体抗体变化及肾组织中金属基质蛋白酶-9 (MMP-9 )、转移生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、血栓调节蛋白(TM)表达的变化.结果 抗dsDNA 在模型组含量高,西药能降低抗dsDNA,中药作用较弱.抗核小体抗体在模型组含量高,中、西药不能明显降低抗核小体抗体.MMP-9 、TNF-α、TGF-β、VEGF 、TM 在模型组表达较高,中药组及中西药组能下调MMP-9 、TNF-α、VEGF 表达,西药组能下调MMP-9 、VEGF 的表达,而对TNF-α表达影响较小,对TM 中药组、西药组、中西药组表达有所下调,但没有统计学意义.结论 凉血化瘀解毒法对MRL /lpr 鼠相关细胞因子表达的影响与现代医学基础治疗基本一致,并协调其部分作用,提示瘀热毒在SLE 发病中具有重要作用.
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三氧化二砷对MRL/lpr小鼠免疫功能和肾组织病理变化的影响
目的 研究三氧化二砷(As2O3)对MRL/lpr小鼠免疫功能和肾脏组织病理变化的影响.方法 45只MRL/lpr狼疮小鼠ip给予环磷酰胺50 mg· kg-1(每周1次)和As2O3 0.8 mg·kg-1,每天1次,共2个月.用ELISA法检测血清抗双链DNA(dsDNA)抗体、干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)浓度;用流式细胞术测定脾CD3+,CD19+,CD3+CD4+和CD3+CD8+细胞亚群的百分比;用PAS染色法观察肾组织病理变化;用免疫荧光方法检测肾组织IgG和补体C3的表达.结果 与给药前比较,给药2个月后,正常对照组血清抗dsDNA抗体水平升高,由给药前1.18 ±0.26升高至1.80 ±0.26(P ＜0.01),As2O3和环磷酰胺组该抗体水平明显降低,分别由给药前1.14 ±0.58和1.09 ±0.22降低至0.92±0.06和0.67 ±0.14(P ＜0.05,P＜0.01).与正常对照组比较:①As2O3和环磷酰胺组血清抗ds-DNA抗体、IFN-γ和IL-12浓度明显降低(P＜0.05),环磷酰胺组抗ds-DNA抗体比As2O3组显著降低(P＜0.01);②As2O3组CD3+,CD3+ CD4+和CD19+细胞百分率明显降低(P＜0.01),环磷酰胺组CD3+,CD3+CD8+和CD19+细胞百分率明显降低(P＜0.01);As2O3组CD3+ CD4+细胞百分率明显降低(P＜0.01);③As2O3和环磷酰胺组小鼠肾小球细胞计数和活动度积分明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),As2O3和环磷酰胺组无显著差异;④As2O3和环磷酰胺组肾IgG表达明显降低(P＜0.05),补体C3表达无明显差异,As2O3和环磷酰胺组之间无显著性差异.结论 As2O3能降低MRL/lpr狼疮小鼠血清抗ds-DNA抗体水平,抑制T,B和Th细胞活化和增殖,降低血清IFN-γ和IL-12水平,从而缓解狼疮肾炎的病理变化.
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脂肪间充质干细胞对MRL/lpr小鼠的治疗效果及对脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响
目的:探讨移植脂肪间充质干细胞(adipose tissue derived stem cells,ADSCs)对MRL/lpr小鼠的治疗作用及对MRL/lpr小鼠脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响.方法:15只12周龄的雌性MRL/lpr小鼠采用随机数字表法分为ADSCs治疗组(ADSCs组)、对照组(control组)和环磷酰胺治疗组(cyclophosphamide,CTX组),每组5只.ADSCs组经尾静脉注射ADSCs,每次注射的细胞数为1×106/150 μL,每周1次,共注射8次;control组经尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液,每周1次,共注射8次;CTX组经尾静脉注射环磷酰胺,剂量为15 mg/kg(体重),每周1次,连用2次,休息2周后重复,共注射4次.留取治疗前和治疗后尿液检测24 h尿蛋白浓度.治疗8周后,处死MRL/Ipr小鼠,以流式细胞仪分析脾细胞Th17/Treg细胞比例变化.结果:(1)24 h尿蛋白浓度变化:治疗前,3组小鼠的24 h尿蛋白浓度差异无统计学意义(P＞0.05);治疗4周后,ADSCs组和CTX组24h尿蛋白浓度显著低于control组,差异有统计学意义[(5.02±1.61) g/Lvs.(7.10±1.63) g/L、(4.90±0.71) g/L vs.(7.10±1.63)g/L,P＜0.05],而且治疗时间越长,效果越明显,治疗8周后,ADSCs组和CTX组24h尿蛋白浓度显著低于control组[(2.24±0.73) g/Lvs.(10.36±1.64) g/L、(3.80±1.45) g/Lvs.(10.36±1.64) g/L,P＜0.01];ADSCs组和CTX组之间24 h尿蛋白浓度差异无统计学意义(P＞0.05).(2)脾脏Treg细胞占CD4+T细胞的百分率:ADSCs组和CTX组脾淋巴细胞中Treg细胞占CD4+T细胞的百分率高于control组,3组分别为13.62％±1.87％、14.14％±1.29％、0.71％±1.23％,但组间差异无统计学意义(P＞0.05).(3)脾脏Th17细胞占CD4+T细胞的百分率:ADSCs组和CTX组脾淋巴细胞中Th17细胞占CD4+T细胞的百分率显著低于control组,3组分别为1.43％±0.20％、1.63％±0.65％、6.37％±1.64％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:移植ADSCs能够减少MRL/lpr小鼠尿蛋白浓度,治疗时间越长,效果越显著.ADSCs能够降低MRL/lpr小鼠脾脏Th17细胞水平,提高Treg细胞水平,负向调节Th17/Treg细胞平衡,进而发挥抗炎和免疫调节的作用.
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CD40 siRNA对 MRL/Lpr狼疮小鼠炎症反应的影响
目的：观察 CD40的小干扰 RNA（small interfering RNA，siRNA）对系统性红斑狼疮（systemic lupus erythe-matosus，SLE）动物模型 MRL／Lpr 小鼠细胞因子 IFN-γ、IL-17、IL-4和抗双链 DNA（anti-double strand DNA，anti-ds-DNA）抗体表达水平的影响，探讨 CD40 siRNA 治疗 MRL／Lpr 小鼠的可能性。方法：16只 MRL／Lpr 小鼠随机分为对照组、空载体组、CD40-siRNA1组及 CD40-siRNA2组，每组4只，将成功构建的 CD40 siRNA 表达载体尾静脉注射MRL／Lpr 小鼠，对照组和空载体组小鼠分别注射等剂量、等比例的磷酸盐缓冲液（PBS）和 pGFP-V-RS 空载体，每隔1天1次，共6次，14 d 处死小鼠，称其脾的质量，组织切片在荧光显微镜下观察小鼠脾是否有 CD40 siRNA 的表达，注射前及注射后第2、5、8、11和14天小鼠尾部采血，ELISA 法检测4组小鼠血清中 IFN-γ、IL-17、IL-4和 anti-dsDNA抗体的表达水平变化，RT-PCR 法检测小鼠脾组织中 CD40 mRNA 的表达水平，免疫组织化学法检测小鼠脾组织中CD40蛋白的表达水平。结果：注射后的 siRNA 表达载体可以在小鼠脾中表达；注射 CD40 siRNA 组的小鼠脾质量减轻，由对照组（141．88±7．81）mg 和空载体组（153．10±7．60）mg 降低至 CD40-siRNA1组（78．85±5．61）mg 和CD40-siRNA2组（80．25±4．07）mg，注射前4组小鼠血清中 IFN-γ、IL-17、IL-4和 anti-dsDNA 抗体的（质量）浓度比较，差异无统计学意义；而注射后第2、5和8天 CD40-siRNA1组和 CD40-siRNA2组 MRL／Lpr 小鼠血清中 IFN-γ、IL-17和（质量）浓度明显下降，CD40-siRNA1组的 IFN-γ的（质量）浓度依次为（118．74±10．32）ng／L（pg／mL）、（115．24±8．26）ng／L、（113．71±5．02）ng／L ，CD40-siRNA2组依次为（117．83±6．83）ng／L 、（114．07±0．97）ng／L、（112．67±9．66）ng／L；CD40-siRNA1组的 IL-17的（质量）浓度依次为（7．05±0．41）ng／L、（6．34±0．76）ng／L、（5．83±0．43）ng／L，CD40-siRNA2组依次为（7．07±0．22）ng／L、（6．35±0．49）ng／L、（6．12±0．80）ng／L；CD40-siRNA1组的 anti-dsDNA 的浓度依次为（7．51±0．29）ng／L、（6．74±0．45）ng／L、（6．32±0．39）ng／L；CD40-siRNA2组依次为（8．19±0．38）ng／L、（7．14±0．50）ng／L、（6．48±0．29）ng／L。IL-4的（质量）浓度明显升高，CD40-si-RNA1组 IL-4的（质量）浓度依次为（26．51±1．81）ng／L、（27．80±1．72）ng／L、（28．08±2．21）ng／L，CD40-siRNA2组依次为（26．28±2．03）ng／L、（28．15±2．95）ng／L、（28．37±1．71）ng／L。CD40-siRNA1组和 CD40-siRNA2组与对照组和空载体组比较差异有统计学意义（P ＜0．05），注射后第11和14天 CD40-siRNA1组和 CD40-siRNA2组中这4个指标的（质量）浓度逐渐恢复至对照组和空载体组的（质量）浓度水平，IFN-γ、IL-17、IL-4的（质量）浓度4组小鼠比较，差异无统计学意义，注射后第11天 CD40-siRNA1组和 CD40-siRNA2组 anti-dsDNA 抗体的水平尽管与对照组和空载体组比较有所提高，4组比较差异有统计学意义（P ＜0．05），而注射后第14天 anti-dsDNA 抗体的水平4组小鼠比较，差异无统计学意义。注射后第14天 CD40-siRNA1组和 CD40-siRNA2组 MRL／Lpr 小鼠脾组织中CD40 mRNA 和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组，差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论：MRL／Lpr 小鼠注射 CD40 siRNA 载体后，血清中 IFN-γ、IL-17和 anti-dsDNA 抗体水平降低，IL-4的浓度升高，CD40 mRNA 和蛋白的表达水平下降，说明 CD40 siRNA 抑制其 mRNA 和蛋白后，MRL／Lpr 小鼠炎症反应减轻，疾病活动度下降，提示其对 SLE 动物模型 MRL／Lpr 小鼠有治疗作用。
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脐带间充质干细胞移植治疗MRL/lpr狼疮鼠的疗效
目的 探讨脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对MRL/lpr狼疮鼠的治疗作用.方法 24只18周龄雌性MRL/lpr小鼠,分为3组:UC-MSCs 1次治疗组(G1)、UC-MSCs 3次治疗组(G2)、对照组(G3).观察体质量,考马斯亮蓝法榆测尿蛋白定量(24 h),酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗双链DNA(dsDNA)抗体水平,观察肾脏、肺病理改变.结果 ①尿蛋白定量(24 h)25周时G1组(2.3±1.9)mg和G2组(1.8±1.4)mg显著低于对照组(3.8±2.1)mg(P<0.05),27周时G1组(2.5±1.5)mg和G2组(1.9±1.2)mg也显著低于对照组(5.4±2.4)mg(P<0.01).②24周时治疗组体质量显著高于对照组(P<0.05),29周时血清肌酐G1组(7.2±3.2)μmol/L和G2组(6.2±2.8)μmol/L显著低于对照组(12.5±2.3)μmol/L(P<0.05).③移植1周时,抗dsDNA抗体滴度G1组(46±11)×102 U/ml和G2组(49±43)×102 U/ml显著低于对照组(99±42)×102 U/ml(P<0.05);29周时G2组(36±15)×102 U/ml显著低于对照组(68±32)×102 U/ml.④肾小球新月体形成率G1组(0.12±0.07)和G2组(0.08±0.02)显著低于对照组(0.20±0.06)(P<0.05),G2组较G1组显著减低(P<0.05).⑤间质性肺炎G1组和G2组较对照组减轻.结论 UC-MSCs对MRL/lpr狼疮鼠有显著疗效,安全且无排斥反应.
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JAK/STAT1信号转导途径在MRL/lpr狼疮鼠不同器官中的活化研究
目的 探讨Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK)/信号转导和转录激活子1(STAT1)信号转导途径在MRL/lpr狼疮鼠肾脏、肺脏、脑等不同器官中的活化和作用.方法 实验组是12周龄以上已经发病的MRL/lpr雌性小鼠,对照组是未发病的同龄MRL/lpr雌性小鼠.采用免疫组织化学方法研究肾脏中磷酸化STAT1的组织分布情况,采用Western blot方法研究STAT1磷酸化蛋白表达,采用SYBR green Ⅰreal-time定量聚合酶链反应(PCR)研究SOCS-1 mRNA的表达;并与肺脏、脑相对比.结果 MRL/lpr狼疮鼠STAT1磷酸化蛋白在各器官均明显活化,肾脏和肺脏的STAT1磷酸化蛋白活化较脑组织明显;肾脏、肺脏和脑组织的SOCS-1基因的表达均升高,但肾脏的SOCS-1基因表达升高程度低于肺脏和脑组织.结论 JAK/STAT1信号转导途径的异常可能参与和促进了系统性红斑狼疮(SLE)各器官病理损害的发生;狼疮肾炎的病理损害还可能与SOCS-1的负反馈调节作用降低有关.
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DNA甲基化转移酶在MRL/lpr狼疮鼠CD4+T淋巴细胞中的表达水平研究及功能分析
目的 研究DNA甲基化转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B在发病MRL/lor狼疮鼠脾脏CD4+T淋巴细胞的表达情况,并对其与免疫相关的甲基化敏感基因ITGAL、CD70的表达水平进行相关性分析.方法 CD4单抗标记的免疫磁珠分选小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)测定DNMTI、DNMT3A、DNMT3B和免疫相关的甲基化敏感基因ITGAL、CD70的相对表达量.结果 ①DNA甲基化转移酶DNMTI、DNMT3A、DNMT3B在发病MRL/lpr狼疮鼠CD4+T淋巴细胞中与健康对照BALB/c小鼠相比,表达水平均有降低趋势,其中DNMT3B差异有统计学意义(P<0.05);CD70在发病MRL/lpr狼疮鼠表达水平升高(P<0.01),ITGAL表达水平呈升高趋势,差异无统计学意义(P>0.05).②相关性分析显示:DNMT3B与CD70分子表达水平呈显著负相关(r=-0.769,P<0.01).结论 DNMT3B在发病MRL/lpr狼疮鼠CD4+T淋巴细胞中表达水平降低,可能通过影响免疫相关的甲基化敏感基因CD70的表达,造成CD4+T淋巴细胞功能异常,参与系统性红斑狼疮的发病.
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全淋巴区电子线照射治疗MRL/lpr狼疮小鼠疗效观察与机制探讨
目的 观察全淋巴区电子线照射治疗MRL/lpr狼疮小鼠的疗效,并探讨其与调节性T细胞的关系.方法 将18只4月龄的MRL/lpr小鼠随机分为阴性对照组、放射治疗组、地塞米松治疗组,每组6只,雌雄各半,阴性对照组予生理氯化钠溶液0.5 ml腹腔注射每日1次,连续2周;放射治疗组全身淋巴结予电子线照射,2 Gy/d,每周5次,连续2周;地塞米松治疗组予地塞米松1 mg/kg腹腔注射每日1次,连续2周,实验结束后2周测各项指标.考马斯亮蓝法测24h尿蛋白,ELISA法检测各组小鼠ANA及抗dsDNA抗体水平,直接免疫荧光法观察各组小鼠IgG抗体在肾脏的沉积情况,PAS染色法观察各组小鼠的肾脏情况,流式细胞仪测定各组小鼠脾脏细胞中调节性T细胞所占比例.用SPSS11.5统计软件进行多样本组间单因素方差.结果 放射治疗组小鼠24 h尿蛋白含量为(3.33±0.17) mg,阴性对照组为(3.97±0.33) mg,两组比较,P＜0.05.放射治疗组小鼠血清抗核抗体ANA水平为(275.12±30.18) U/ml,抗小鼠dsDNA抗体为(455.74±43.38)IU/ml;阴性对照组小鼠分别为(434.82±36.63)U/ml和(956.78±37.69)IU/ml,两组比较,均为P＜0.05.放射治疗组与地塞米松治疗组小鼠肾小球内IgG沉积较阴性对照组减少,强度较弱,放射治疗组、地塞米松治疗组两组无明显差异.PAS染色可见放射治疗组与地塞米松治疗组肾脏病变较阴性对照组减轻,放射治疗组、地塞米松治疗组两组无明显差异.流式细胞仪检测显示,放射治疗组小鼠调节性T细胞所占比例为(1.08±0.52)％,地塞米松治疗组为(1.18±0.60)％,阴性对照组为(0.38±0.14)％,放射治疗组、地塞米松治疗组两组的调节性T细胞所占比例较阴性对照组升高(P＜0.05).结论 全淋巴区电子线照射能降低MRL/lpr狼疮小鼠尿蛋白、血清抗核抗体、双链DNA抗体水平,对肾脏病理改变亦有恢复作用,其机制可能与提高体内调节性T细胞的比例有关.
