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异补骨脂素对紫外线诱导人真皮成纤维细胞损伤的保护作用及机制研究
目的 研究异补骨脂素对人真皮成纤维细胞(human dermal fibroblasts, HDF)增殖活性及抗老化相关蛋白表达的影响,并探讨其作用机制.方法 将细胞按随机数字表法分为空白组、模型组、雌二醇组、异补骨脂素组、雌激素受体拮抗剂+雌二醇组、雌激素受体拮抗剂+异补骨脂素组、P38通路阻断剂组.分别给予不同药物进行干预24 h.除空白组外,其余各组细胞给予紫外线照射,照射剂量为150 mJ/cm2.采用MTT法检测细胞增殖率,采用Western blot法检测细胞中胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ, COLⅠ)、MMP-1、雌激素受体β(estrogen receptor β, ERβ)、P38、p-P38蛋白表达量,实时荧光定量PCR法检测MMP-1 mRNA表达.结果 与模型组比较,异补骨脂素10、1、0.1、0.01 μmol/L组HDF细胞增殖率升高(P<0.01);异补骨脂素10 μmol/L组HDF细胞COLⅠ[(0.326±0.006)比(0.176±0.007)]、ERβ[(0.281± 0.011)比(0.143 ± 0.006)]蛋白表达升高(P<0.01),MMP-1[(0.256 ± 0.006)比(0.395 ± 0.006)]和p-P38[(0.224±0.003)比(0.318±0.005)]蛋白表达降低(P<0.01);与异补骨脂素10 μmol/L组比较,雌激素受体拮抗剂+异补骨脂素组 ERβ[(0.120 ± 0.007)比(0.281 ± 0.011)]蛋白表达下降、MMP-1 mRNA[(1.377±0.012)比(1.024±0.010)]表达升高(P<0.01).结论 异补骨脂素可能通过ER-P38 MAPK信号通路使MMP-1降解,进而促进胶原合成,达到预防和治疗光老化的目的.
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雌激素受体beta亚型单独活化对CBA/J小鼠Treg细胞的抑制作用
目的:研究雌激素受体beta亚型(ERβ)单独活化对CBA/J小鼠Treg细胞的调节作用.方法:应用流式细胞术检测Oil组、E2组、DMSO组、DPN组小鼠胸腺CD4+ CD25+ Foxp3-GITR+细胞及CD4+ CD25+ Foxp3+ GITR+细胞占CD4+T细胞百分比、小鼠脾脏CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞占CD4+T细胞百分比、外周脾表达GITR的Treg细胞百分比及Treg细胞中GITR的平均荧光强度.结果:E2组与Oil组之间、DPN组与DMSO组之间小鼠胸腺CD4+ CD25+ Foxp3-GITR+细胞及CD4+ CD25+ Foxp3+ GITR+细胞占CD4+T细胞百分比无明显变化.与DMSO相比,DPN组的CD4+ CD25+ Fxop3+ Treg细胞占CD4+T细胞百分比明显下降(P＜0.05),表达GITR的Treg细胞下降(P＜0.05),Treg细胞中GITR的平均荧光强度下降(P＜0.05).然而,与Oil组相比,E2组上述指标并无明显变化.结论:DPN单独激活ERβ后虽然不影响胸腺nTreg细胞的发育,却对CBA/J小鼠外周脾脏的Treg细胞起明显的抑制作用,提示ERβ单独激活可能促进自身免疫性疾病的发生、发展.
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雌激素受体ERbeta的克隆及重组慢病毒表达载体的构建
目的:构建含人雌激素受体ERbeta基因的重组慢病毒表达载体,为以ERbeta为干预靶点的乳腺癌相关研究奠定基础.方法:经RT-PCR扩增ERbeta基因片段,并将其连接到入门载体pENTRTM3C,然后经LR重组转入到慢病毒表达载体pLenti/V5-DEST中,进而构建含ERbeta基因的慢病毒载体,并进行基因测序鉴定和PCR鉴定.结果:pLenti-ERbeta表达载体测序结果与GenBank中ERbeta基因序列一致,并且其经PCR可扩增出ERbeta基因片段.结论:成功构建携带人ERbeta基因的重组慢病毒表达载体.
