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加味茵陈蒿汤对雌激素致肝内胆汁淤积症大鼠肝脏AQP8 mRNA和蛋白表达的影响
目的：观察加味茵陈蒿汤对雌激素致肝内胆汁淤积症大鼠肝脏水通道蛋白8（AQP8）mRNA和蛋白表达的影响，探讨加味茵陈蒿汤治疗妊娠肝内胆汁淤积症可能的分子机制。方法：50只SD雌性大鼠，体质量180-200 g，随机分为正常组（N，n=10）和模型组（M’，n=40）。M’组大鼠皮下注射17-α乙炔雌二醇5 mg·kg-1·d-1，连续5天，建立肝内胆汁淤积症模型，N组大鼠给予相同体积的丙二醇皮下注射。5天后，M’组大鼠随机分为模型组（M，n=10）、加味茵陈蒿汤高剂量（Zg，n=10）、中剂量（Zz，n=10）和低剂量组（Zd，n=10），分别给予生理盐水和高、中、低剂量的加味茵陈蒿汤灌胃，连续7天。7天后处死大鼠，留取肝脏组织，置于液氮中保存，分别运用实时定量PCR法及蛋白免疫印迹法检测AQP8 mRNA与蛋白表达情况。结果：与正常组（N）比较，模型组（M）大鼠肝脏组织AQP8 mRNA与蛋白表达水平降低（P<0.01）。与模型组（M）比较，高、中和低剂量的加味茵陈蒿汤均可增加大鼠肝脏组织AQP8 mRNA与蛋白表达水平（P<0.05）。此外，研究还发现，随着加味茵陈蒿汤给药剂量的增加，其上调AQP8 mRNA和蛋白表达的作用增强。结论：加味茵陈蒿汤治疗妊娠肝内胆汁淤积症的分子机制可能是通过增加肝脏组织AQP8 mRNA与蛋白表达水平实现的。
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增液汤干预干燥综合征模型鼠 AQP1／AQP8的表达规律研究
目的：观察增液汤干预下干燥综合征（Sjogren＇s Syndrome，SS）模型小鼠肺及结肠组织中水通道蛋白AQP1（aquaporin1）、AQP8（aquaporin8）的表达规律。方法：选用BALB/c小鼠，各组10只，免疫诱导法建立干燥综合征小鼠模型，产生SS特异性临床表现和病理改变，采用免疫组化和Western blot蛋白质印迹法观察增液汤对SS模型小鼠肺及结肠组织中AQP1/AQP8表达的影响。结果：增液汤可以增强肺及结肠组织中AQP1的蛋白表达（ P＜0.01），对AQP8无影响。结论：AQP1在干燥综合征模型鼠多组织中的表达下调，可能是干燥综合征水液代谢障碍，多脏器损伤的机制之一；增液汤恢复机体阴液，起到“增水”功效可能与上调AQP1蛋白表达有关。
关键词： AQP1 AQP8 干燥综合征 Western blot 增液汤 -
复方地芬诺酯建立便秘模型与AQP8的相关性研究
目的：通过复方地芬诺酯法建立大鼠慢传输型便秘模型，探索一种简便易行的大鼠便秘造模方法，并探讨大鼠便秘造模过程中对结肠AQP8表达的影响。方法：SD大鼠30只随机分为空白组和便秘模型组。空白组大鼠用生理盐水灌胃，便秘模型组用复方地芬诺酯灌胃，观察两组大鼠大便粒数及大便湿重。大鼠便秘模型建立后。将大鼠集体处死，取大鼠近端结肠标本，用免疫组织化学的方法检测两组大鼠结肠AQP8的表达情况。使用彩色病理图像分析系统对阳性表达的平均光密度值进行半定量分析。结果：建立便秘模型末次给药后，便秘组24 h大便粒数、大便湿重均低于空白对照组（P＜0.05），差异有统计学意义，表明大鼠慢传输型便秘模型成功建立；免疫组化结果显示：便秘组结肠AQP8的MD值大于空白对照组（P＜0.05），差异有统计学意义。结论：复方地芬诺酯灌胃法成功建立大鼠便秘模型，便秘模型的建立与大鼠结肠AQP8的表达增高相关。
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NH4Cl对人肝细胞系LO2氨转运相关蛋白RHCG和AQP8表达的影响
目的 检验氯化铵是否能够特异性地刺激肝细胞,使其内部与氨离子转运有关的RHCG和AQP8基因表达发生变化.方法 培养人正常肝脏细胞(LO2)、甲状腺癌细胞(TPC-1)、卵巢癌细胞(SKOVR-3)和食管癌细胞(9706),NH4Cl(2.5、5、10、20、40和50 mmol/L)对4种细胞作用24 h后,MTT法检测细胞的增殖；荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测LO2细胞经5、10和20 mmol/L的NH4Cl处理不同时间(6、12和24 h)后,AQP8 和RHCG基因及蛋白的表达；10 mmol/L的NH4Cl处理TPC-1、SKOVR-3和9706细胞不同时间(6、12和24 h)后,AQP8和RHCG基因及蛋白的表达.结果 随着NH4Cl浓度的增加,氨对肝细胞LO2的增殖抑制率逐渐增加且明显大于其他细胞系；10 mmol/L NH4Cl作用于LO2细胞6h时,RHCG基因表达量明显下调(P＜0.05),而AQP8基因的表达量在作用12 h后较对照组明显增加(P＜0.05)；10 mmol/L NH4Cl作用于L02细胞24 h时,AQP8蛋白表达量较对照组显著增加(P＜0.0.5),而RHCG无变化；相同浓度NH4C1作用其他细胞系相同时间时,AQP8和RHCG的基因和蛋白水平均未见显著性变化.结论 在氨升高的环境中,人肝细胞通过调节氨转运相关蛋白AQP8和RHCG的量来维持对氨摄取的平衡,减少氨对肝细胞的特异性损伤,在其他细胞系中无此现象.
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温补肾阳法影响慢性腹泻大鼠模型结肠AQP8表达和cAMP/cGMP比值的实验研究
目的 探讨中医温补肾阳法对慢性泄泻大鼠模型结肠黏膜组织水通道蛋白(AQP)8表达和cAMP/cGMP比值的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠54只,以随机分配方式,分为正常组、模型组、对照组(蒙脱石散组、参苓白术丸组)和干预组(右归丸高剂量组、右归丸低剂量组),共6组.除正常组外均采用水环境小平台站立法复合高乳糖饲料喂养的方法复制慢性腹泻模型,模型成功后,6组分别给予生理盐水(15 ml/kg)、生理盐水(15 ml/kg)、蒙脱石散溶液(1.0 g/kg)、参苓白术丸溶液(2.4 g/kg)、右归丸高剂量溶液(2.3 g/kg)、右归丸低剂量溶液(1.2 g/kg)灌胃,每天1次,连续给药7 d.取结肠组织,通过免疫组化的方法观察结肠黏膜组织AQP8-mRNA、AQP8、cAMP/cGMP的变化.结果 与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜组织AQP8-mRNA、AQP8、cAMP/cGMP的表达呈"显著降低"的数值反应;相较于模型组,右归丸高剂量组大鼠结肠粘膜组织AQP8-mRNA、AQP8的表达及cAMP/cGMP比值呈"显著提高"之数值反应.右归丸低剂量组和参苓白术丸组可部分提高AQP8-mRNA、AQP8的表达及cAMP/cGMP比值,西药组实验数据改善情况不明显.结论 温补肾阳法(右归丸)可以在慢性腹泻大鼠模型体内充分发挥药效,使cAMP/cGMP比值升高,使大鼠模型结肠黏膜组织中的AQP8-mRNA、AQP8的表达水平提升,致使对水分的吸收作用增强,从而达到止泻的目的.
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感染性休克对大鼠肠上皮水通道蛋白8表达的影响
目的 通过建立大鼠感染性休克模型,探讨其对肠上皮水通道蛋白8(AQP8)表达的影响及与肠组织水肿的关系.方法 32只健康SD大鼠随机分成正常对照组(C组)、感染性休克2h、8h和24h组.采用静脉注射大肠杆菌脂多糖(LPs)制作感染性休克模型.Westem blot检测肠上皮AQP8蛋白的表达,同时测定肠组织含水量,并做相关分析.结果 感染性休克组各时间点肠组织含水量均明显升高,与C组比较差异有统计学意义(P＜0.05),且以休克后8h时高(P＜0.05).C组AQP8呈现低密度带;感染性休克后2h、8h、24h时AQP8密度带明显增强,活性增加(P＜0.05);休克后8h时点AQP8密度带更高,蛋白表达更强(P＜0.05).相关分析表明,肠道组织的含水量与AQP8蛋白表达呈正相关.结论 感染性休克使AQP8表达增加,与感染性休克后肠组织水肿的形成有关.
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AQP8在胰腺导管腺癌中的表达及其临床意义
目的 研究水通道蛋白8(AQP8)在胰腺导管腺癌癌组织(PC)、癌旁正常胰腺组织(Non-PC)中的表达及其临床意义.方法 通过免疫组织化学(IHC)方法检测AQP8在 87例胰腺导管腺癌患者配对的石蜡包埋PC、Non-PC中的表达,并对AQP8的表达与胰腺导管腺癌患者临床资料间的关系进行分析.同时利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及 Western blot方法各检测10例配对新鲜冻存PC、Non-PC中 AQP8的表达.结果 IHC显示AQP8主要表达于PC导管细胞的细胞质中,AQP8在PC组中的阳性表达率为79. 31％(69/87),而Non-PC组阳性表达率为18. 39％(16/87),两组阳性表达差异有统计学意义(P<0.001), AQP8的表达与肿瘤瘤体直径(P<0. 001)、分化程度(P<0. 001)、淋巴结的转移(P<0.001)以及TNM分期(P<0. 001)有显著相关性. qRT-PCR 及 Western blot 显示 PC 组中 AQP8 mRNA 及其蛋白表达量均显著高于配对的Non-PC组,两组间差异有统计学意义(P<0. 01<0. 001).结论 AQP8的表达与胰腺导管腺癌的瘤体直径、分化程度、淋巴结的转移以及TNM分期均有显著相关性,AQP8的检测有助于胰腺导管腺癌患者病情严重程度评估.
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温阳益气方对便秘模型大鼠结肠水通道蛋白3、8表达及肠道动力的影响
[目的]观察温阳益气方对慢传输型便秘模型大鼠水通道蛋白(AQP)3、8的影响,探讨其治疗便秘的机制.[方法]采用洛哌丁胺灌胃法复制慢传输型便秘大鼠模型.将40只大鼠分为造模组(N=30),正常对照组(N=10);造模成功后再将造模大鼠随机分为模型组、温阳益气方组和莫沙必利组,每组10只,并给予相应的药物治疗,连续治疗2周.治疗结束后,采用碳末推进试验检测大鼠结肠传输功能,分别采用免疫组化法及实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测AQP3和AQP8的表达.[结果]与正常对照组比较,便秘模型组碳末推进率明显降低,AQP3、AQP8蛋白和mRNA表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01).与模型组比较,温阳益气方组及莫沙必利组炭末推进率显著升高,AQP3、AQP8的蛋白和mRNA表达水平均显著降低(P<0.05),但2组间比较,差异无统计学意义(P>0.05).[结论]温阳益气方可能是通过降低肠道AQP3、AQP8的表达,减少肠腔液体重吸收,增加肠道内粪便含水量,起到治疗慢传输型便秘的作用.
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AQP8在正常人绒毛滋养层细胞与绒癌JAR细胞株中的表达
目的:探讨AQP8在正常人绒毛滋养细胞和绒癌 JAR细胞株中的表达差异,及其表达改变与绒癌发生的关系.方法:正常人绒毛滋养细胞(正常组)的原代培养、纯化及鉴定;人绒癌JAR细胞株(绒癌组)的培养.以免疫组织化学法、免疫荧光激光共聚焦和RT-PCR技术检测AQP8蛋白和AQP8 mRNA在正常人绒毛滋养细胞和绒癌JAR细胞株细胞膜上的表达.结果:(1)应用免疫组化方法,在正常组中,仅能从显微镜中肉眼看到AQP8的极低表达,摄影效果不佳,而在绒癌组中AQP8的阳性细胞率为93.27%±14.45%,远高于正常组.(2)应用免疫荧光染色后行激光共聚焦成像技术发现,在相同的条件及激发强度下,可见AQP8在绒癌组呈绿色阳性表达,而在正常组中未见绿光,但当加强激发强度后,仍可探及AQP8在正常组的表达.(3)应用RT-PCR技术,在正常组与绒癌组中,均检测到AQP8 mRNA的表达.绒癌组AQP8的OD值(0.98±0.35)明显高于正常组AQP8的OD值(0.32 ±0.04)(P＜0.05).结论:AQP8表达异常上调,滋养细胞内、外水、电解质平衡将被破坏,可能是导致绒癌发生的原因之一.
