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卵裂球电融合方法制作小鼠多倍体胚胎
目的:探索制作小鼠多倍体胚胎的方法.方法:应用卵裂球电融合方法,制作小鼠四倍体和八倍体胚胎.结果:经卵裂球电融合得到的多倍体胚胎,在体外培养条件下,可以发育到囊胚,其囊胚的形态与正常二倍体囊胚无区别,但囊胚中的细胞数量随着染色体倍性的增加而减少.进行电融合时,电压强度直接影响到卵裂球的融合效率,适宜的电压强度与胚胎的染色体倍性存在一定的联系.结论:卵裂球电融合方法可以用来制作小鼠多倍体胚胎.
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青天葵多倍体诱导、鉴别研究
【目的】对青天葵进行多倍体诱导和鉴别研究，获得多倍体植株。【方法】通过比较自然和组培条件下根状茎和球茎的诱导率、浸泡法和琼脂法，筛选青天葵多倍体诱导材料和诱导方法。采用正交设计法考察秋水仙素浓度（200、300、400、500 mg/L），秋水仙素作用时间（7、14、21、28 d），二甲基亚砜（DMSO）浓度（0、10、20、40 mL/L），6-糠氨基嘌呤（KT）浓度（0、1．0、2．0、4．0 mg/L）对诱导率的影响。采用形态学、细胞学、染色体法对处理后的植株进行鉴定。【结果】选用琼脂法并用300 mg/L秋水仙素、10 mL/L DMSO、2．0 mg/L KT处理组培根茎28 d，诱导率可达到50%，诱导效果较好。所得植株外形表现出巨型化，叶片的长、宽以及高分别是二倍体的152．17%、158．67%、60．90%。经细胞学鉴定，处理后的叶片表皮细胞气孔长度、宽度、气孔密度、叶绿体数目分别是未经过处理的138．46%、153．00%、59．09%、109．09%。经染色体鉴定，所得四倍体数（约40）是二倍体数目（约20）的2倍，可确定为四倍体植株。【结论】本研究成功获得青天葵多倍体植株，这将为改良品种、丰富育种资源、深入开展良种选育等研究奠定基础。
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MKL1在巨核细胞分化中的表达及其作用的实验研究
目的 了解MKL1在巨核细胞分化、成熟中的作用.方法 以人外周血来源CD34~+细胞巨核细胞分化为模型,采用荧光实时定量PCR法研究MKL1基因在不同分化阶段巨核细胞中的表达情况,通过构建慢病毒载体在CD34~+细胞中过表达MKL1基因,利用血细胞涂片和流式细胞仪考察MKL1过表达细胞经细胞因子刺激分化后的形态、CD41~+百分比及DNA含量.结果 经qPCR研究发现,MKL1基因在成熟的巨核细胞中的表达6.8倍高于未分化的CD34~+细胞,以及2倍高于单个核巨核细胞.MKL1过表达组经诱导分化后CD41~+巨核细胞百分比与多倍体细胞百分比分别为61.5%和52.9%,均显著高于对照组36.3%和33.4%的比例.结论 MKL1基因在巨核细胞分化中表达逐渐上调,其外源表达促进人外周血来源CD34~+细胞巨核细胞分化和多倍体化.
关键词： MKL1 巨核细胞 动员人外周血CD34~+细胞 分化 多倍体 -
mTOR/p70s6k参与巨核细胞多倍体化调控
目的:研究巨核细胞多倍体细胞周期调控的机制.方法:Western blot分析多倍体细胞模型中mTOR/p70s6k通路信号分子表达和磷酸化修饰位点的变化,流式细胞仪双荧光分析S6K1不同结构域磷酸化位点修饰与细胞周期各时相的关系.结果:诺考达唑诱导的Dami细胞可作为相对同步化的多倍体细胞周期模型,mTOR表达增加及第2448位丝氨酸位点磷酸化,发生在G1期进入S期,S6K1的第421位苏氨酸/第424位丝氨酸位点磷酸化发生在G2/M期.结论:mTOR/S6K1通路参与巨核细胞多倍体细胞周期的调控.
