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铁皮石斛野生居群遗传多样性的RAPD分析与鉴别
目的采用RAPD分子标记技术,对铁皮石斛8个野生居群的遗传多样性、亲缘关系以及分子鉴别等进行研究.方法筛选随机引物进行RAPD分析,通过UPGMA聚类,研究铁皮石斛各居群间的遗传关系,构建居群亲缘关系的分子系统树;利用特异性条带对铁皮石斛野生居群进行指纹分析鉴别.结果共筛选出10个有效引物,在8个野生居群材料的RAPD扩增中共得到439个位点,平均每个引物扩增出43.9个位点,每个居群扩增出54.9个位点;在所获得的104条可重现谱带中,9条是单态的,95条是多态的,多态性程度达91.35%,遗传距离在0.590～0.727之间,平均为0.686.结论铁皮石斛居群间遗传差异明显,具有较丰富的遗传多样性;RAPD可以作为铁皮石斛野生居群遗传多态性、居群亲缘关系和分子鉴别研究的有效手段;引物S412可以有效鉴别铁皮石斛的8个野生居群.
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苗药艾纳香不同居群及不同部位的质量研究
目的 研究苗药艾纳香不同居群及不同部位的质量.方法 挥发油采用药典方法蒸馏提取;总黄酮采用50％乙醇回流法提取,紫外可见分光光度法测定.结果 艾纳香新鲜、阴干及烘干叶片挥发油含量分别为2.0167、1.5917、1.2751 ml/kg,且三者间差异有统计学意义.叶片挥发油含量显著高于嫩枝,分别为1.1417 ml/kg和0.6313 ml/kg.不同居群挥发油含量为0.9333～2.5667ml/kg,平均为1.6490ml/kg,居群间差异有统计学意义;不同居群总黄酮含量为13.43％～17.48％,平均为14.87％,居群间差异无统计学意义.结论 提取艾纳香挥发油时,应采用新鲜叶片,且好即采即用;作为药材使用的艾纳香叶片应采用阴干法干燥;艾纳香嫩枝可用于提取挥发油,以充分发挥艾纳香资源价值;不同居群艾纳香叶片挥发油含量差异显著,总黄酮含量差异不显著,在选择艾纳香优良种源时,应以挥发油含量作为主要指标.
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不同产地忽地笑的叶绿体基因psbA-trnH序列分析
目的 通过叶绿体基因sbA-trnH序列分析,探讨我国忽地笑种质资源的系统进化关系及分子鉴定方法.方法 分别提取15省(市)52个忽地笑居群的DNA,经PCR扩增叶绿体基因sbA-trnH序列及测序,并用Mega 5.0等软件对测序结果进行分析.结果 52条sbA-trnH序列长度为544～656 bp,GC含量为35.8％～37.0％,遗传距离为0.000 00～0.009 47;核苷酸变异(多态性)位点数共33个,其中简约信息位点9个,单一突变位点18个,插入/缺失片段6个;单倍型数量(H)10个,单倍型多态性水平(Hd) 0.749,核苷酸多态性(π)0.002 63,收集的忽地笑资源具有较高的遗传多样性.大简约法(maximum parsimony,MP)系统树中52个居群聚为4类,并且该聚类结果与其地理分布基本一致.结论 不同产地忽地笑居群的遗传变异较大,psbA-trnH序列可作为忽地笑种源分子鉴定的依据;我国忽地笑种质资源在进化上具有明显的地域性特征.
关键词： 忽地笑 居群 psbA-trnH序列 核苷酸多态性 系统聚类 -
淫羊藿属经典分类学研究进展及存在的问题
对我国淫羊藿属经典分类的研究现状进行简要回顾,并对其中存在的问题进行分析.淫羊藿属是分类学上较为特殊和困难的属,类群数量近30年迅速增长,且90％以上的物种为中国特有,但近一半的物种为外国研究者命名(其中Steam命名了17种),且绝大多数是依据少量栽培个体命名,种间界限模糊不清使复合体大量存在.其根本原因是缺乏足够的野外调查和形态性状统计,对各类群性状变异幅度、变异式样和分类价值研究不够.淫羊藿属存在分种过细问题,根据非间断性状命名的类群可能存在,大量种的“真实身份”还需进一步讨论.未来研究应充分重视并应用“居群”概念,应用现代化的技术软件DELTA进行分类描述.
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箭叶淫羊藿复合体的分类问题及讨论
对箭叶淫羊藿复合体的分类问题进行梳理,并对其产生原因进行分析.通过形态性状的整理和归纳表明,淫羊藿属至少有10个类群与箭叶淫羊藿关系密切,类群间界限模糊不清,形态性状在类群间存在过渡和交集,其分类依据可能只是整体形态变异数集中的某一子集,不足以成立新变种或新种.将贵州淫羊藿处理为箭叶淫羊藿异名,普定淫羊藿降为箭叶淫羊藿光叶变种.毡毛淫羊藿、龙头虎毡毛淫羊藿、剑河淫羊藿、多花淫羊藿、裂叶淫羊藿和靖州淫羊藿作为天平山淫羊藿异名.箭叶淫羊藿复合体的分类终追溯到箭叶淫羊藿与天平山淫羊藿的关系,两类群主要的区别在于花序类型,是狭而直圆锥花序(箭叶淫羊藿)还是聚伞状/铺散型圆锥花序(天平山淫羊藿),及由此导致小花数量和大小上的差异.但天平山淫羊藿多个关键分类性状与箭叶淫羊藿叶存在重叠,其分类处理仍需进一步讨论,有待进一步野外居群的系统观测和深入细致研究.缺乏全面的野外调查和形态性状统计,对各类群性状变异幅度、变异式样和分类价值研究不够及对物种概念和划分标准理解的差异是造成其分类学上难以处理的根本原因.
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浙江产香茶菜属植物8个居群的RAPD分析
目的从DNA分子水平上探讨香茶菜属植物种群变异特点.方法从70个随机引物中筛选出10个具有较高多态性检测能力的引物.用这10个随机引物对浙江境内3种香茶菜的8个居群进行了RAPD分析,对得出的RAPD结果应用SPSS10.0进行的聚类分析和应用CANOCO3.10进行的除趋势对应分析.结果共检测出144个位点,其中单态位点11个,占7.64%,多态位点133个,占92.36%.分析结果表明,浙江产香茶菜不同种、同一种的不同居群间存在明显的遗传分化,其中种间的差异要大于种内,大萼香茶菜Isodon macrocalyx居群间的差异要比香茶菜I.amethystoides 居群的小.结论香茶菜形态与化学成分的变异有一定的遗传学基础.
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用RAPD技术评估苍术居群间的亲缘关系
用 RAPD 方法分析了苍术不同居群间的亲缘关系.选取10个10 碱基的随机引物对苍术的10个居群共83个个体进行扩增,获得100个DNA片断.用 RAPD ista nce 软件计算了不同居群间的 Jaccard 遗传距离,得距离矩阵,分别用单联法、全联法、类平均法作聚类图,结果表明,该10个居群可划分为3个类群:即类群1,大别山类群(Ta); 类群2,南苍术类群(Wu、Lu、Hu、Xu、Ca、Li);类群3,北苍术类群(Tt、Da、Lao).在这3 个类群中,南、北苍术之间的遗传距离相对较近,大别山类群与南、北苍术之间的距离则较远.根据本试验的结果及前人关于苍术精油成分差异的聚类结果,作者认为大别山类群比较特殊.
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道地药材建泽泻的RAPD研究
目的为了探讨道地药材与非道地药材之间遗传变异的大小,并建立道地药材的品质鉴定方法.方法运用了随机扩增多态DNA(RAPD)技术,对福建、江西、四川产的泽泻科植物泽泻Alisma orientalis进行了研究.结果同种异地药材所形成的不同的居群,具有不同的遗传特征.结论RAPD技术可作为鉴别道地药材的参考方法.
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3个产地天门冬块根结构比较研究
通过石蜡切片技术,对贵州、云南和湖南产天门冬块根进行结构比较.结果发现,贵州凯里天门冬块根的表皮细胞数量为6～7列,湖南通道天门冬和云南曲靖天门冬较少,为4～5列；湖南通道天门冬块根内皮层具有非常明显的凯氏带,细胞壁增厚明显,贵州凯里和云南曲靖天门冬凯氏带不明显或没有凯氏带；贵州凯里天门冬木质部和韧皮部束相互间隔排列的数量为20～35个,湖南通道天门冬为15 ～30个,云南曲靖天门冬为7～15个.结果表明,表皮细胞数量的多少、内皮层中凯氏带的有无及壁是否增厚、木质部和韧皮部束相互间隔排列的数量是3个居群天门冬显微鉴别的关键.
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苍耳子中酚酸类化合物及不同品种和居群苍耳子中总酚酸含量的测定
目的:研究中药苍耳子(Fructus Xanthii)中的化学成分;测定不同居群和不同品种苍耳属植物果实中的总酚酸含量以评价其品质.方法:运用各种层析方法分离纯化化合物,以绿原酸作对照,用紫外分光光度法测定总酚酸的含量.结果:(1)从苍耳子中分离到6个咖啡酰奎宁酸类化合物,以及咖啡酸和阿魏酸;(2)从中国29个居群采集到的样品,总酚酸含量为0.31%～1.44%.在采集到2个品种及1个变种的苍耳属植物中,近无刺苍耳X.sibiricum var.subinerme样品的总酚酸含量较其他两种都偏低.苍耳X.sibiricum样品中,从上海采集的3号苍耳子样品总酚酸含量高,达1.44%,而从江西新建采集的12号样品含量低,仅0.38%.结论:5-O-咖啡酰奎宁酸,1,4-二-O-咖啡酰奎宁酸和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸是从苍耳属植物中首次分离获得.不同品种和不同居群苍耳子药材中,总酚酸含量的差异较为显著.若以总酚酸含量作为指标评价苍耳子药材的品质,则认为上海和福建三明产苍耳子为优质种群.
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金铁锁的地理分布及分布区的初步分析
目的 对金铁锁地理分布现状和影响其分布的生态因子进行分析,为其引种驯化、规范化种植提供依据.方法 运用GIS绘制金铁锁的地理分布图.对金铁锁分布区内12个居群进行实地考察和生态因子分析.结果 金铁锁主要集中分布在横断山区,同时云南中部、东北部和贵州西北部也是一个相对集中的分布区域.对金铁锁分布影响较大的因子是经度、极端高温、湿度、土壤因子.结论 横断山区是金铁锁的分布中心.在进行金铁锁栽培时要着重考虑所选择区域为红壤地区的山坡、草丛等环境.
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峨眉黄连与三角叶黄连不同居群盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量测定
通过峨眉黄连、三角叶黄连不同海拔高度的居群中小檗碱类生物碱含量的比较,拟证实生态环境和栽培管理对其药材质量影响较大；黄连药材种质资源不同,质量存在较大的差异,峨眉黄连根、根茎、叶的小檗碱含量均较高,间接说明古代雅连药材质量优于其它黄连(同在野生状态下)与基源种质有关.
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鱼腥草不同居群营养成分及抑菌效果比较
目的 比较不同鱼腥草居群的差异.方法 采用随机小区设计,栽培不同鱼腥草居群,测定不同居群的产量、营养成分含量、挥发性油含量和对金黄色葡萄球菌、八叠球菌的抑菌效果.结果 ①HYXC02居群的地上部分产量高,WYXC03居群的地下部分产量高;②WYXC03地下部分维生素C、蛋白质和可溶性糖含量高于其它居群;HYXC02和WYXC03居群的黄酮含量明显高于其他两个居群;WYXC03居群地上部分的挥发性油含量高,WYXC02居群的地下部分的挥发性油含量高;③WYXC02居群地上部分挥发性油对两种菌的抑菌效果均好.结论 WYXC02,WYXC03两个居群比较适合药食兼用的栽培.
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密脉鹅掌柴居群的ITS1和ITS2分子鉴定研究
目的 对密脉鹅掌柴3个居群内的ITS区DNA序列进行生物信息分析.方法 采用ITS区特异引物ITS4/ITS5对密脉鹅掌柴3个居群进行PCR扩增并测序.结果 密脉鹅掌柴的ITS区全序列总长为658bp,其中ITS1、5.8S和ITS2序列长度分别为223bp、164bp和223bp.在ITS1、ITS2片段上,3个居群的密脉鹅掌柴种间K2P小遗传距离均大于种内K2P大遗传距离,NJ系统发育树也显示3个居群的密脉鹅掌柴均可与Genbank数据库中鹅掌柴属17个外源种植物鉴别开,其中ITS2和ITS1序列上分别具有2个和1个有效鉴别位点.结论 ITS1和ITS2序列均适用于密脉鹅掌柴的DNA条形码,且ITS2比ITS1更适合密脉鹅掌柴的分子鉴定.
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滇龙胆不同居群rDNA-ITS序列分析
目的 研究云南代表性产地8个滇龙胆居群的rDNA ITS遗传差异,评价ITS用于滇龙胆产地鉴别的可行性.方法 运用常规PCR法扩增rDNA ITS后直接测序.结果 得到8个居群107个样品rDNA中的ITS和5.8SrDNA全长序列.其中,ITS2在滇龙胆种内居群间和居群内变异为丰富,但未找到能反映特定居群的稀有单倍型.结论 不同产地滇龙胆rDNA-ITS变异较大,但ITS在鉴别滇龙胆的产地上应用价值有限.
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天平山淫羊藿不同居群基于淫羊藿多苷成分的质量评价
目的 利用高效液相色谱法对天平山淫羊藿覆盖其分布区的8个居群基于4种主要活性成分,即朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷(合称为淫羊藿多苷,ABCI)进行含量测定,开展系统全面的质量评价研究.同时,为淫羊藿属植物药用种质筛选和资源开发利用提供参考和启示.方法 采用Zorbax SB-Cs柱(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-1.44％乙酸水,流速1.0 ml/min,柱温25℃,检测波长272 nm.结果 8个居群的天平山淫羊藿质量均优于淫羊藿苷0.5％的药典标准及淫羊藿多苷1.3％的建议标准.但居群间质量差异显著,朝藿定A和朝藿定B的含量分别从低于检测限到1.42％和2.39％,朝藿定C和淫羊藿苷的居群间变异范围分别为2.18％ ～7.80％和0.51％ ～7.76％.结论:综合考虑天平山淫羊藿的丰富资源和优异质量,支持其作为药用.其中,贵州产天平山淫羊藿普遍优于其他产区,可作为优异种质资源重点筛选.
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箭叶淫羊藿不同居群淫羊藿多苷的变异研究及利用启示
目的 探讨箭叶淫羊藿16个居群(含光叶变种1居群)的主要活性成分变异及地理分布规律.方法 利用高效液相色谱法对药材中重要并具特征性的活性成分,即朝藿定A、B、C和淫羊藿苷(简称淫羊藿多苷)所构成的峰(简称ABCI组峰)进行指纹图谱特征分析.结果 16个居群可划分为4大类6亚类.朝藿定C主导谱普遍,75％的居群为该类型.AHHS(安徽黄山)居群为空白谱,HBLT(湖北罗田)为唯一淫羊藿苷主导且朝藿定B强于朝藿定C的居群.结论 基于ABCI的化学变异研究及类型划分对箭叶淫羊藿的种质资源评价、筛选和利用具有重要指导意义.HNZJ、HNLS、HBHF和HBLT四个居群的ABCI多苷峰形和强度均较理想,可作为箭叶淫羊藿药用种质资源筛选的重点;AHHS居群不宜药用,但适合作为林下地被观赏;HBLT居群是非常特殊和优异的药用兼观赏种质资源.
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金铁锁不同居群培养物生长量比较
多从金铁锁Psammosilence tunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu 8个不同居群的组培物生长量比较,初步筛选出云南丽江云杉坪和昆明小墨雨两居群比其他居群有优势,可考虑作为优良种源.
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金铁锁居群繁殖生物学初步研究
云南省昆明市小墨雨调查样地的金铁锁,主要生长于以石灰岩为母岩的酸性红壤土,居群呈成群型分布.在自然条件下只以种子行有性繁殖;种子成熟散布后,随即发芽形成幼苗;幼苗可成功越冬者,经2～3年达到性成熟;每株有花序1～5条,为二或三歧聚伞花序,每花序平均有花20.64朵,仅顶花能形成果实.
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不同居群老鸦瓣核型分析
目的:明确不同居群老鸦瓣核型差异,为老鸦瓣遗传资源保护和人工选育提供依据.方法:采用常规压片法对9个居群老鸦瓣进行核型分析.结果:初步判断9个居群老鸦瓣均为二倍体,其中7个居群染色体基数x=12,染色体数目为2n=2x=24;另有2个居群染色体基数x=24,染色体数目为2n=2x =48.老鸦瓣染色体类型有m、sm、st.染色体比值范围在1.88 ～ 2.34之间;不对称系数介于62.99％ ～ 71.97％之间;核型有3种类型,包括2A、3A和3B,其中以3B型多,占67％,且2A型为首次发现.结论:不同居群老鸦瓣在核型上存在较大变异.
