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针刀松解颈周腧穴对大鼠退变颈椎间盘Ⅰ、Ⅱ型胶原及组织形态学的影响
目的:探讨针刀延缓椎间盘退变的作用机制.方法:建立大鼠静动力失衡性颈椎间盘退变模型,确认造模成功后,将大鼠随机分为模型组、夹脊穴组、颈周腧穴组、药物组,并设空白组,每组15只.夹脊穴组取颈2～7椎旁夹脊穴,颈周腧穴组取颈周的双“脑空”穴、“脑户”穴、“大椎”穴、双“曲垣”穴、双“天宗”穴,每5d治疗1次,各治疗3次;药物组采用布洛芬+颈复康灌胃,每天1次,治疗10 d.治疗结束继续喂养20 d后运用免疫组化与定量多聚酶链反应(PCR)法对退变颈椎间盘Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白进行检测,并在光镜下行椎间盘组织形态学变化观察,按Miyamoto的标准做形态学评分.结果:Ⅰ型胶原的表达强度及基因表达,模型组高于空白组(P＜0.05),夹脊穴组、颈周腧穴组、药物组低于模型组(P＜0.05),夹脊穴组、颈周腧穴组低于药物组(P＜0.05);Ⅱ型胶原的表达强度及基因表达,模型组低于空白组(P＜0.05),夹脊穴组、颈周腧穴组、药物组高于模型组(P＜0.05),夹脊穴组、颈周腧穴组高于药物组(P＜0.05).形态学评分,模型组高于空白组(P＜0.05),夹脊穴组、颈周腧穴组小于模型组和药物组(P＜0.05);椎间盘退变程度由轻到重顺序为空白组＜颈周腧穴组/夹脊穴组＜药物组/模型组.结论:针刀松解颈周腧穴可调控椎间盘细胞外基质胶原系统,抑制Ⅰ、Ⅱ型胶原的转换,延缓颈椎间盘退变.
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Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白在不同损伤类型动物模型椎间盘组织内的含量变化规律
目的 通过对损伤动物模型椎间盘软骨终板细胞内Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA的水平进行定量测定,明确椎间盘软骨细胞在椎间盘损伤后纤维化修复过程中的细胞学功能变化规律.方法 建立兔椎间盘损伤模型,选用健康新西兰大白兔40只,随机分为纤维环穿刺组、上位软骨终板单次穿刺组、上下位软骨终板多次穿刺组、假手术对照组,分别于建模手术术后第2天及第2、8、12、24周在每组中随机选取2只实验动物获取椎间盘标本,逆转录聚合酶链反应测定椎间盘软骨终板细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA水平.首先提取椎间盘软骨终板组织的RNA,通过核酸测定仪测定RNA浓度及RNA浓度与蛋白浓度比值,采用Revertaid M-Mulv逆转录酶进行逆转录,设计Ⅰ、Ⅱ型胶原引物,建立聚合酶链反应体系,用0.5×TBE电泳缓冲液配制2％的琼脂糖凝胶电泳(120V,40 min),紫外灯下观察扩增结果,测定不同电泳条带的灰度值.结果 术后各手术组Ⅰ型胶原mRNA水平在术后8周后呈现进行性上升的趋势,上升的幅度与损伤程度相关.Ⅱ型胶原的mRNA水平在纤维环穿刺组及上位终板单次穿刺组中开始2周内出现一过性的上升,随后开始进行性下降;而在上下位软骨终板多次穿刺组则从术后开始一直呈现下降的趋势.结论 损伤椎间盘髓核组织内软骨细胞Ⅰ型胶原的合成量随时间呈现持续升高的趋势,而Ⅱ型胶原的合成量在小幅升高后开始进行性下降.Ⅰ、Ⅱ型胶原在损伤椎间盘软骨细胞内的形成变化规律有别于自然退变.
