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补阳还五汤对肺纤维化中HMGB1-RAGE信号通路的调控作用
目的:观察肺纤维化中诱导免疫损伤和异常修复的高迁移率族蛋白Box-1(high mobility group Box-1 protein,HMGB1)及晚期糖基化终产物受体(receptor of advanced glycation end-product,RAGE)的表达,及补阳还五汤对HMGB1-RAGE信号通路的调控作用.方法:144只SD大鼠随机分为6组,分别为正常组,博莱霉素(BLM)模型组,补阳还五汤低、中、高剂量组(6.83,13.66,27.32 g·kg-1),阳性药组(强的松,4.2 mg·kg-1),动物实验采用博莱霉素气管注入法复制肺纤维化模型后,分别给予补阳还五汤高、中、低剂量和强的松灌胃,于造模后第7,14,28天分批提取样本.采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测肺组织中的HMGB1,RAGE mRNA的表达;采用蛋白质免疫印记法(Western blot)检测HMGB1,α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle action,α-SMA)的表达.细胞实验采用含药血清药理学的实验方法,以5％,10％,15％,20％的补阳还五汤含药血清和空白血清来干预HMGB1诱导刺激的人肺成纤维细胞(HFL1),采用Western blot法检测α-SMA蛋白的表达.结果:动物实验中,与正常组比较,模型组在第28天显著上调HMGB1 mRNA(P ＜0.01),在第7天和第14天显著上调RAGEmRNA(P ＜0.01),在各时间点显著上调HMGB1,α-SMA(P ＜0.01);与BLM模型组比较,补阳还五汤高剂量组在第14天和第28天显著下调HMGB1 mRNA(P ＜0.01),在第7天和第14天显著下调RAGE mRNA(P＜0.01),在各时间点显著下调HMGB1和α-SMA蛋白(P＜0.01).细胞实验中,与空白组比较,20％空白血清预培养加HMGB1组显著升高α-SMA蛋白(P＜0.01);与20％空白血清预培养加HMGB1组比较,不同剂量的补阳还五汤含药血清显著下调细胞中α-SMA蛋白(P＜0.01).结论:补阳还五汤可抑制HMGB1在大鼠肺组织中和人肺成纤维细胞中所引起的RAGE,α-SMA的表达增加.提示补阳还五汤可能通过阻断HMGB1/RAGE信号通路,减少肌成纤维细胞生成,对肺纤维化的发生发展起到防治作用.
关键词： 补阳还五汤 肺纤维化 高迁移率族蛋白Box-1 晚期糖基化终产物受体 -
HMGB1对人肺成纤维细胞ERK1/2-NF-κB信号通路的影响及补阳还五汤含药血清的干预作用
目的:观察肺纤维化中诱导免疫损伤的高迁移率族蛋白Box-1(high mobility group Box-1 protein,HMGB1)刺激人肺成纤维细胞(HFL1)后细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinase1/2,ERK1/2),核转录因子-κB(nuclearfactor kappa B,NF-κB)信号通路的活化情况,以及补阳还五汤含药血清对HMGB1刺激HFL1后以上信号通路的干预作用.方法:采用含药血清药理学的实验方法,以5％,10％,15％,20％的补阳还五汤含药血清和空白血清来干预HMGB1诱导刺激的HFL1细胞.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞总蛋白中ERK1/2,胞浆胞核中NF-κB p65蛋白的表达.结果:与空白组比较,HMGB1刺激组诱导后ERK 1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达均增高(P ＜0.05,P＜0.01);与20％空白血清预培养加HMGB1组比较,HMGB1刺激组诱导后ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达均增高(P＜0.05);与HMGB1刺激组比较,补阳还五汤含药血清各组能够降低ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达,其中15％和20％补阳还五汤含药血清组降低ERK1/2的表达(P＜0.05);胞浆10％补阳还五汤含药血清组和胞核20％补阳还五汤含药血清组降低NF-κB p65蛋白的表达(P＜0.05);15％补阳还五汤含药血清组降低IL-1β的含量(P＜0.05).结论:补阳还五汤含药血清在体外实验中,可抑制HMGB1引起的人肺成纤维细胞中ERK1/2/NF-κB信号通路的活化,减少IL-1β等炎症因子分泌.提示补阳还五汤可能通过调控人肺成纤维细胞中ERK1/2/NF-κB信号通路,防治肺纤维化的发生发展.
