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南蛇藤提取物含药血清对小鼠肝癌Hepal-6细胞的增殖能力和VEGF-c表达水平的影响
目的:制备南蛇藤提取物(Celastrus orbiculatus extracts,COE)兔含药血清,初步研究其对小鼠肝癌Hepal-6细胞株的增殖能力及血管内皮生长因子-c(VEGF-c)表达水平的影响.方法:取新西兰白兔,以20 mg·kg-1·d-1南蛇藤提取物ig,按通法制备含药血清.设立低、中、高剂量组(分别含有10%,20%,30%的南蛇藤提取物含药血清),作用小鼠肝癌Hepal-6细胞,同时设阴性对照组及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)阳性对照组,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测含药血清对细胞增殖的影响,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养上清VEGF-c的含量.结果:形态学上,3组COE含药血清均使细胞发生典型的凋亡改变;MTT结果显示COE中、高剂量组的含药血清能抑制Hepal-6细胞增殖,并呈明显的时效关系;ELISA结果表明COE含药血清作用24 h后,中、高剂量组VEGF-c水平降低,与对照组相比有显著性差异.结论:COE含药血清能够有效地抑制小鼠肝癌Hepal-6细胞的增殖,并降低细胞VEGF-c的表双达水平.
关键词： 南蛇藤提取物 肝癌 含药血清 增殖 血管内皮生长因子-C -
南蛇藤提取物通过Cofilin1抑制胃癌BGC-823细胞转移的机制
目的:探讨南蛇藤乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)抑制胃癌侵袭转移的作用及其机制.为胃癌的中医药预防与治疗寻求新的靶点,为开发有效的抗胃癌中药奠定理论和实验基础.方法:利用前期蛋白质二维电泳技术,在胃癌中筛选出COE作用于胃癌的差异大的靶点蛋白.然后利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE(20,40,80 mg·L-1)干预后细胞中丝切蛋白1(Cofilin 1,CFL1)水平的表达情况.后利用分子克隆技术,将胃癌细胞株BGC-823中的CFL1表达抑制,然后联合COE进行干预,检测COE是否能影响胃癌细胞的侵袭转移.结果:在前期实验基础上经过细胞水平的验证,CFL1能够在胃癌细胞中稳定高表达;Western blot结果显示,COE能抑制胃癌细胞中CFL1的表达,经不同质量浓度COE(20,40,80 mg·L-1)处理24 h的BGC-823细胞,其CFL1的水平受到了不同程度的抑制.随着COE的浓度递增,CFL1的表达逐渐减弱.与空白组比较,COE40,80 mg·L-1组CFL1表达显著减少(P＜0.01);利用小干扰RNA(siRNA)技术干扰胃癌BGC-823细胞株后,CFL1表达受到明显抑制,与空白组比较,siRNA-CFL1慢病毒转染组BGC-823细胞中CFL1受到显著抑制(P＜0.01);细胞侵袭实验(transwell)显示COE能显著减少胃癌BGC-823细胞敲低表达后细胞的透膜细胞数(P＜0.01).结论:COE能明显抑制胃癌BGC-823细胞的转移,其机制可能与抑制CFL1的过度表达有关.
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南蛇藤提取物对人食管鳞癌TE-8细胞凋亡的影响
目的:探讨南蛇藤提取物对人食管鳞癌TE-8细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨.方法:MTT法检测不同质量浓度的南蛇藤提取物作用于TE-8细胞24、48h后细胞的增殖情况.南蛇藤提取物作用TE-8细胞24h后,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;JC-1试剂盒检测线粒体膜电位的损伤;TUNEL法检测DNA损伤情况;Western blot法检测丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白的表达情况.结果:南蛇藤提取物能明显抑制人食管鳞癌TE-8细胞的增殖,呈时间及浓度依赖;南蛇藤提取物能促进细胞凋亡,降低线粒体膜电位,诱导细胞内DNA损伤,阻断MAPK信号通路的表达,呈浓度依赖.结论:南蛇藤提取物能够抑制TE-8细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与南蛇藤提取物抑制MAPK信号通路的表达有关.
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南蛇藤提取物对人肝癌细胞增殖、迁移及血管内皮生长因子-C表达的影响
目的 探讨南蛇藤提取物抑制人肝癌转移的分子机制.方法 人肝癌HCCLM6细胞生长于培养液中进行传代,取对数生长期细胞进行实验.南蛇藤提取物组共分为10、20、40、80、160 mg/L 5个浓度,阳性对照组给予5-氟尿嘧啶(5-Fu)注射液180 mg/L,阴性对照组不做处理.分别观察南蛇藤提取物对HCCLM6细胞增殖和迁移能力的影响,并检测南蛇藤提取物对HCCLM6细胞及其培养上清中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)蛋白表达的影响.结果 南蛇藤提取物组作用24、48h时160 μg/ml对细胞增殖的抑制率高(P＜0.01).南蛇藤提取物组和阳性对照组穿膜细胞数较阴性对照组明显减少(P＜0.01)；南蛇藤提取物组10、20、40、80μg/ml浓度穿膜细胞数多于阳性对照组,并呈浓度依赖性(P＜0.05或P＜0.01).南蛇藤提取物组各浓度和阳性对照组VEGF-C蛋白水平均低于阴性对照组(P＜0.05或P＜0.01). 结论 南蛇藤提取物能抑制HCCLM6细胞的增殖、迁移及下调VEGF-C蛋白的表达水平,这可能是其抑制肝癌转移的部分机制.
关键词： 南蛇藤提取物 肝癌 增殖 迁移 血管内皮生长因子-C -
南蛇藤提取物对人胃癌SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白表达的影响
目的 探讨南蛇藤茎醋酸乙酯提取物(COE)对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白表达的影响.方法 建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组,COE低、中、高剂量(10、20、40 mg/kg)组和希罗达(267 mg/kg)组,每组7只,各组ig给药,给药3周后检测裸鼠体质量、肿瘤体积、瘤质量等,绘制肿瘤生长曲线,并计算抑瘤率.应用TUNEL法检测COE处理后各组移植瘤组织中的细胞凋亡情况;免疫组织化学法和Western blotting技术分别检测各组移植瘤组织和SGC-7901肿瘤细胞中p53、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 COE能够较好地抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长,能明显缩小肿瘤体积,且呈剂量依赖性.COE低、中、高剂量组的抑瘤率分别为33.3％、46.8％、57.7％.TUNEL法显示COE处理后肿瘤细胞凋亡较模型组明显增多.免疫组化结果显示COE处理后移植瘤组织中p53和Bax蛋白表达有升高的趋势,而Bcl-2蛋白表达有降低的趋势.其中与模型组相比,COE高剂量组中p53和Bax蛋白表达显著升高(P＜0.001),而Bcl-2蛋白表达显著降低(P＜0.001).Western blotting结果显示与免疫组化有大致相同的变化趋势.结论 COE对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤具有明显的抑制作用,其机制可能与上调p53和Bax的表达,下调Bcl-2的表达,诱导胃癌细胞凋亡有关.
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南蛇藤提取物对Lewis大鼠佐剂性关节炎(AA)预防及治疗作用
目的:观察南蛇藤提取物对Mtb 诱发的Lewis 大鼠佐剂型关节炎的影响.方法:以Mtb(Heat-killed mycobacterium tubercuolsis H37Ra)免疫Lewis大鼠(1 mg/只),诱发佐剂性关节炎模型,免疫后8天,出现临床类风湿关节炎症状.大鼠分成预防组及治疗组,分别灌胃南蛇藤(1.5～3 g/kg)、生理盐水及甲氨碟呤(0.5 mg/kg).用积分法定期评定四肢炎症程度.实验结束后,大鼠关节做病理检测.结果:实验结果表明,预防组与模型对照组比较,南蛇藤提取物显著降低关节炎模型大鼠的临床积分,抑制关节炎症的发生(P＜0.05,P＜0.01).治疗组中南蛇藤提取物组与甲氨碟呤组比较无显著性差异(P＞0.05).病理结果显示南蛇藤提取物可减轻Lewis 大鼠关节的损伤破坏程度.结论:南蛇藤提取物对AA 模型大鼠关节炎症及病情进展有显著的抑制作用.
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南蛇藤提取物通过Cofilin 1调控细胞骨架重组抑制人胃癌细胞上皮间质转化(EMT)的研究
目的 研究南蛇藤乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extracts,COE)对TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞EMT的影响.方法 TGF-β1诱导人胃癌SGC-7901细胞造模,设阴性对照组、模型组和不同浓度COE实验组.MTT法检测细胞毒作用和生长抑制作用;Transwell小室法检测细胞的侵袭和转移能力;Western blot法检测细胞EMT生物标志分子(biomarker)E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白和相关的丝切蛋白1(Cofilin 1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases2,MMP-2)、MMP-9蛋白的表达水平;TRITC-标记的鬼笔环肽细胞骨架荧光染色,激光共聚焦显微镜检测细胞骨架.结果 与模型组相比:COE能下调人胃癌SGC-7901细胞的Cofilin 1蛋白水平和EMT标志蛋白N-钙黏蛋白、波形蛋白的表达水平,同时上调E-钙黏蛋白的表达水平,显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的EMT进程,呈明显的剂量依赖性;COE能降低人胃癌SGC-7901细胞的穿膜细胞数;另外COE(10、20、40mg/L)能下调人胃癌SGC-7901细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平;COE能明显抑制细胞骨架发生改变.结论 COE能明显抑制人胃癌SGC-7901细胞EMT进程,降低细胞侵袭和转移能力,其机制可能与抑制细胞骨架改变和降低Cofilin 1、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平有关.
