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基于HSF1高表达H9c2细胞的参芎葡萄糖注射液抗氧化损伤作用探讨
目的:建立热休克转录因子1(HSF1)高表达的H9c2细胞系,考察在HSF1高表达的情况下参芎葡萄糖注射液(SGI)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用.方法:构建GV1422-HSF1的重组质粒,并利用FuGENE 6转染试剂将重组质粒转染至H9c2细胞中,用遗传霉素(G418)来筛选稳定转染细胞株,并用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HSF1和热休克蛋白70(HSP70) mRNA和蛋白的表达情况,来鉴定HSF1高表达的H9c2细胞系(H9c2-HSF1)是否建立成功.用H2O2(300 μmol·L-)处理H9c2-HSF1细胞0.5h构建氧化损伤模型,考察HSF1高表达的情况下参芎葡萄糖注射液预处理对细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)漏出量、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,同时Western blot检测HSF1和HSP70蛋白表达情况.结果:Real-time PCR和Western blot实验结果显示:筛选出来的稳定转染细胞的HSF1和HSP70蛋白表达显著上调(P＜0.01),表明H9c2-HSF1细胞系构建成功.经参芎葡萄糖注射液预处理6h,H202损伤0.5h后,与H9c2+ H2O2组和H9c2-HSF1+ H2O2组比较,对应给药组细胞的HSF1和HSP70蛋白表达显著上调(P＜0.01),细胞存活率显著增高(P＜0.01),LDH,CK释放量和MDA含量显著减少(P＜0.01);ROS含量显著降低,GSH-Px和SOD活性明显升高.结论:本研究成功构建了HSF1高表达H9c2细胞系,并发现HSF1高表达能明显增强参芎葡萄糖注射液抗氧化损伤作用,其机制可能不在于增加细胞清除ROS能力,但可能与上调HSP70表达相关,需要进一步研究.
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稀土元素钬对小鼠3种抗氧化酶活力的影响
[目的]研究稀土元素钬对小鼠肝脏3种抗氧化酶活性的影响,找出剂量-效应关系.[方法]2次给小鼠腹腔注射氧化钬的盐酸溶液,相间24h,第2次注射24h后取肝脏检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)的活性,并进行统计分析,绘制出剂量-效应曲线.[结果]在10～40mg/kg体重剂量范围内3种酶的活性随剂量的增加而升高,40 mg/kg体重酶活性达峰值,与阴性对照比较,t检验显示差异极显著(P＜0.01);在40～160mg/kg体重剂量范围内3种酶的活性随剂量的增加而呈逐渐下降趋势.[结论]钬元素在低剂量下可能具有一定的抗氧化损伤作用,在高剂量时具有致抑制抗氧化酶活性的作用.
