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黄芪散有效部位群对胰岛素抵抗HepG2细胞SREBP-1c及其靶基因表达的影响
目的:观察黄芪散有效部位群(HQS)对胰岛素抵抗HepG2细胞固醇调控元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)及其靶基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测HQS对细胞活性的影响,采用高糖高胰岛素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型,造模同时予以不同浓度HQS进行干预,并以二甲双胍(MET)作为阳性药,另设空白组.采用荧光D-葡萄糖同系物2-脱氧-D-葡萄糖(2-NBDG)检测细胞糖摄取量,测定细胞内甘油三酯(TG),游离脂肪酸(FFA)含量,油红O染色法观察细胞脂质沉积情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞内SREBP-1c,乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1),脂肪酸合成酶(FAS),硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD1)基因的表达.结果:依据MTT实验结果,选择25,50,100 mg·L-1分别作为HQS低、中、高质量浓度值(HQS-L,HQS-M,HQS-H),处理时间为24 h.与空白组比较,模型组细胞糖摄取显著减少(P＜ 0.01),细胞内TG,FFA含量显著升高(P＜0.01),胞浆内可见大量红色的小泡性脂滴,SREBP-1c,ACC1,FAS,SCD1 mRNA的表达显著上调(P＜0.01).与模型组比较,不同质量浓度HQS均可显著升高细胞糖摄取量(P＜0.05,P＜0.01),HQS-H,HQS-M可显著降低细胞中TG,FFA含量(P＜0.01),减少细胞内脂滴数量,HQS-L亦可降低FFA含量(P＜0.05),此外,HQS-H可显著下调SREBP-1c,ACC1,FAS,SCD1 mRNA的表达(P ＜0.05,P＜0.01),HQS-M亦可下调SREBP-1c,FAS,SCD1 mRNA的表达(P＜0.05),对ACC1 mRNA表达具有一定程度的抑制.结论:HQS可能通过抑制SREBP-1c的表达,减少脂质合成,改善HepG2细胞胰岛素抵抗.
关键词： 黄芪散有效部位群 脂毒性 胰岛素抵抗 HepG2细胞 固醇调控元件结合蛋白-1c -
黄芪散有效部位群对Ⅱ型糖尿病大鼠肝脏AMPK/SREBP-1c通路的影响
目的 观察黄芪散有效部位群(HQS)对Ⅱ型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏单磷酸腺苷活化蛋白激酶/固醇调控元件结合蛋白-1c(AMPK/SREBP-1c)通路的影响.方法 采用低剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射联合高脂饲料喂养建立T2DM大鼠模型,造模同时给予HQS (2.4 g·kg-1)灌胃给药,连续16周.测定大鼠血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NEFA)及肝脏TC、TG含量;HE、油红O染色法观察肝脏病理变化;Western Blot法检测肝组织中AMPK(Thr172)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1) (Ser79)、SREBP-1c(Ser372)、胰岛素受体底物-2(IRS-2) (Ser731)、蛋白激酶B(Akt) (Ser473)磷酸化蛋白以及AMPKα、SREBP-1c核蛋白(nSREBP-1c)、ACC1、脂肪酸合成酶(FAS)、IRS-2、Akt蛋白的表达;qPCR法检测肝组织中SREBP-1c、ACC1、FAS、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD1)、IRS-2、Akt mRNA的表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠血浆TC、TG、NEFA及肝脏TC、TG水平均显著升高(P＜0.05);肝组织存在明显的脂肪变性;p-SREBP-1c、IRS-2蛋白的表达和p-AMPK/AMPKα、p-ACC1/ACC1、p-Akt/Akt比值显著降低(P＜0.05,P＜0.01),AMPKα、nSREBP-1c、ACC1、FAS蛋白表达和p-IRS-2/IRS-2比值显著升高(P＜0.05,P＜0.01);SREBP-1c、ACC1、FAS、SCD1 mRNA表达水平明显上调(P＜0.05,P＜0.01),IRS-2、Akt mRNA表达下降(P＜0.05).与模型组比较,HQS组大鼠血浆TC、TG、NEFA及肝脏TC、TG水平显著降低(P＜0.05);肝组织脂肪变性明显减轻;p-SREBP-1c、IRS-2蛋白表达和p-AMPK/AMPKα、p-ACC1/ACC1、p-Akt/Akt比值显著升高(P＜0.05,P＜0.01),nSREBP-1c、ACC1、FAS蛋白表达和p-IRS-2/IRS-2比值显著降低(P＜0.05,P＜0.01);SREBP-1c、ACC1、FAS、SCD1 mRNA表达水平明显下调(P＜0.05),IRS-2 mRNA表达显著上调(P＜0.05).结论 HQS可能通过调节AMPK/SREBP-1c通路,减少脂质合成,改善T2DM大鼠肝脏胰岛素抵抗.
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黄芪散有效部位群对Ⅱ型糖尿病大鼠肝糖原及糖异生酶的影响
目的 观察黄芪散有效部位群(HQS)对Ⅱ型糖尿病大鼠肝糖原含量及糖异生酶的影响.方法 采用低剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射联合高脂饲料喂养建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型,造模同时给予HQS(2.4 g·kg-1)灌胃给药,连续16周.给药12周进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT),测定不同时间点血糖浓度,计算血糖-时间曲线下面积(AUC);给药14周测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);测定大鼠体质量、 肝脏质量,计算肝脏系数;采用HE染色观察肝脏组织和细胞结构;采用过碘酸-希夫(PAS)染色观察肝细胞糖原颗粒并测定肝糖原含量;qPCR法检测磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、 葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)mRNA表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠的FBG、FINS、HOMA-IR、OGTT不同时间点血糖值、AUC值、大鼠体质量、肝脏质量以及肝脏系数均显著升高,肝脏中PEPCK及G6Pase mRNA表达水平亦明显升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001).与模型组比较,HQS组的FBG、FINS、HOMA-IR水平、OGTT第0,60,120 min血糖值及AUC值、大鼠的体质量、肝脏质量及肝脏系数均显著降低,肝脏PEPCK mRNA表达亦明显下降,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001),G6Pase mRNA表达有明显下降的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 HQS通过增加肝糖原合成及下调糖异生酶的表达来抑制糖异生,从而改善Ⅱ型糖尿病大鼠肝脏胰岛素抵抗.
