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山核桃叶总黄酮苷元及其主要单体成分球松素查尔酮的抗氧化活性
目的:测定山核桃叶总黄酮苷元(TFA)及其主要单体成分——球松素查尔酮(PSC)的抗氧化活性.方法:采用柱层析法分离、富集山核桃叶中的总黄酮苷元及单体化合物球松素查尔酮;测定总黄酮苷元中总酚含量,通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基实验、铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定法、抗脂质过氧化(LPO)实验、抗蛋白氧化羰基(PCO)生成实验,对TFA和PSC进行体外抗氧化活性研究.结果:富集的山核桃叶总黄酮苷元中总酚含量用没食子酸当量(GAE)表示为(283.75±10.82) mg·g-1;TFA和PSC对DPPH自由基清除的抑制浓度(IC50)分别为(20.05±1.74),(11.66±0.61) mg·L-1,抑制脂质过氧化的IC50分别为(74.62 ±5.39),(24.38 ±1.24) mg·L-1,抑制蛋白过氧化的IC50分别为(174.29±11.26),(86.74 ±7.89) mg·L-1;TFA和PSC均具有较强的抗氧化能力;除了对铁离子还原力外,其他各项指标化合物PSC均显著强于TFA.结论:山核桃叶中含有较高含量的黄酮苷元,其富集的总黄酮苷元具有较强的抗氧化活性,已知成分大于50％,而球松素查尔酮是其主要药效物质,值得进一步开发应用.
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球松素查尔酮对C3H10T1/2细胞成脂分化的影响
查尔酮类化合物是一种广泛存在于多种药用植物中的黄酮类化合物,具有抑制细胞成脂分化的作用.为研究山核桃叶中提取分离得到的球松素查尔酮对小鼠胚胎间充质干细胞(C3H10T1/2)成脂分化的影响,该实验利用MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,内盐]法检测细胞增殖情况;油红O染色和异丙醇萃取法检测细胞成脂分化情况;GAP-PAP酶法检测细胞中甘油三酯含量;分别采用荧光RT-PCR和Western blot检测成脂分化关键转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ),CCAAT增强子结合蛋白α (C/EBPα)和分化标志物脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4) mRNA和蛋白表达.结果显示当球松素查尔酮浓度小于等于50 μmol·L-1,对C3H10T1/2细胞的增殖活性无影响;油红O染色和异丙醇萃取法及GAP-PAP酶法检测结果表明球松素查尔酮能明显减少C3H10T1/2细胞成脂分化和甘油三酯含量;荧光RT-PCR和Western blot检测表明球松素查尔酮能下调FABP4,PPARγ和C/EBPα mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01).结果提示,球松素查尔酮能够明显抑制C3H10T1/2细胞成脂分化.
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高效液相色谱法测定山核桃叶中5个黄酮苷元含量
目的:采用反相高效液相色谱法同时测定山核桃叶中汉黄芩素、白杨素、小豆蔻明、球松素查尔酮、松属素的含量.方法:采用戴安Ultimate 3000系统,使用戴安Acclaim 120 C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.1％乙酸水溶液(70∶30)为流动相,流速1.0 mL· min-1,柱温为30℃,检测器为戴安Ultimate 3000 DAD,以对应化合物大吸收波长(汉黄芩素272nm、白杨素262 nm、小豆蔻明342 nm、球松素查尔酮342 nm、松属素284 nm)为检测波长,同时对山核桃叶中5个黄酮苷元进行含量测定.结果:在上述条件下,汉黄芩素、白杨素、小豆蔻明、球松素查尔酮、松属素浓度分别在1.27 ～25.3、2.56 ～51.2、1.29 ～25.6、5.01 ～100.2和5.06～101.2 μg·mL-1范围内线性关系良好,平均加样回收率(n=9)分别为98.83％、99.27％、101.1％、98.70％和99.54％;测得山核桃叶中上述的5个化合物平均含量(n=3)分别为0.0183％、0.1142％、0.0618％、0.7934％和0.3368％.结论:本法同时测定山核桃叶中汉黄芩素、白杨素、小豆蔻明、球松素查尔酮、松属素5个黄酮苷元,为评价和监控山核桃叶质量及其深入研究与开发奠定了良好基础.
