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变性高效液相色谱技术在线粒体基因突变检测中的应用
目的 以变性高效液相色谱(DHPLC)技术分析检测线粒体肌病患者线粒体基因突变,以明确诊断.方法 收集4例临床诊断为线粒体肌病的患者,以50例健康体检者作为对照,提取患者肌肉组织及对照组外周血细胞DNA,用聚合酶链反应(polymerase chin reaction,PCR)扩增线粒体22个tRNA基因,利用变性高效液相色谱分析技术(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)对PCR产物进行突变筛选,出现异常峰型的tRNA基因进行核苷酸序列测定,明确突变位点.结果 4例线粒体肌病患者均检测出线粒体基因突变,突变分别为:例1tRNA-Val基因发生A1625G纯合突变,例2 tRNA-Val基因发生A1625G/A杂合突变,例3 RNA-Arg基因发生A10411C/A杂合突变,例4 RNA-Trp基因发生T5553C纯合突变.结论 DHPLC能有效地用于线粒体基因突变的检测,该方法简便,结果稳定,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段.
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线粒体基因7.4kbp大片段缺失突变与侵袭性牙周炎的关系研究
目的:探讨线粒体基因(mtDNA)7.4 kbp大片段缺失突变和侵袭性牙周炎(AgP)的关系.方法:选取20 例AgP患者(AgP组)和20 例牙周健康者(对照组),收集外周血及牙周翻瓣术及牙冠延长术中切取的牙龈组织,同时收集10 例慢性牙周炎者(CP组)牙周翻瓣术中切取的组织.采用长距离PCR方法检测血样本和牙龈组织样本中mtDNA 7.4 kbp大片段缺失,比较3 组间的差异.结果:AgP组20 例牙龈组织中1 例存在mtDNA 7.4 kbp大片段缺失,AgP组2 例组织和CP组1 例组织中检测到目前尚未报告过的mtDNA 5 537 bp大片段缺失突变.所有血样和对照者牙龈组织中均未检测到大片段缺失突变.结论:AgP患者牙龈组织中存在mtDNA 7.4 kbp 大片段缺失,发现一种新的mtDNA 5 537 bp大片段缺失突变.
关键词： 侵袭性牙周炎(AgP) 线粒体基因 7.4kbp大片段缺失 -
一个与线粒体基因A1555G突变有关的非综合征型耳聋家系的报道
目的：探讨一母系遗传非综合征型耳聋家系线粒体基因的突变情况，明确该病的分子病因。方法收集该母系遗传非综合征型耳聋家系成员的外周血 DNA样本及临床资料，利用聚合酶链反应扩增mtDNA目的片段后直接测序的方法，对所有患者进行线粒体基因突变的检测，应用 Sequencher4.9软件对上述测序结果进行分析。结果该家系的患者均为感音神经性聋，均存在线粒体基因A1555G点突变。结论线粒体基因突变的检测，可以明确耳聋的分子病因，为耳聋人群提供遗传信息及婚育帮助，具有重要的预防意义。
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MtDNA 12SrRNA基因1555G点突变10家系表型分析及16SrRNA基因序列分析
目的:探讨线粒体基因(mtDNA)1555G点突变与遗传性耳聋的关系及突变家系对氨基糖甙类抗生素(AmAn)耳毒敏感性差异的原因.方法:收集10个遗传性耳聋家系,抽取外周血,提取DNA;PCR扩增mtDNA目的片段,以A1w 26 I环限制性内切酶检测1555G点突变;对mtDNA 12SrRNA及16SrRNA基因测序.按有无AmAn用药听力差别以及用药至发病间隔将10个家系分为AmAn耳毒敏感及不敏感两类,分析两种表型与基因序列变化之间的关系.结果:经酶切及测序证实,10家系均含mtDNA1555G点突变.表型分析显示AmAn耳毒敏感及不敏感家系各5个.基因测序显示:mtDNA 16SrRNA基因序列变化为:2230G点突变、2230AG插入、2243AG插入,均出现在AmAn耳毒敏感家系中,呈母系遗传;不敏感家系中未发现.结论:单纯1555G点突变家系表现为无诱因的渐进性遗传性耳聋或先天性耳聋;1555G突变合并16SrRNA基因突变者对AmAn高度敏感,表现为家族性AmAn敏感致聋.
