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电针减轻大鼠心肌缺血损伤的AMPKα-HDAC5-HIF-1α信号级联机制
目的:通过检测心肌组织中腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPK α)、组蛋白去乙酰化酶5(HDAC5)、缺氧诱导因子(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达变化,探讨电针减轻心肌缺血(Myocardial ischema,MI)损伤的AMPKα-HDAC5-HIF-1α信号级联机制.方法:将36只健康雄性SD大鼠随机分成假手术组(n=6)、假手术电针组(n=6)、模型组(n=12)、模针组(n=12),模型组和模针组结扎冠状动脉左前降支制作MI模型;假手术组和假手术电针组开胸后暴露心脏,但不结扎.假手术电针组和模针组于手术后第2天电针双侧"内关"穴,疏密波,2Hz/15Hz,强度1.5～2mA,持续30min,每日1次,连续治疗4d;假手术组和模型组不予电针干预,但采用同样的方法抓取、固定.采用TTC染色观察大鼠心肌梗死面积,放射免疫法检测血清肌钙蛋白T(cTnT)表达变化,实时定量PCR检测VEGF mRNA表达,蛋白质免疫印迹法检测心肌组织中AMPKα、HDAC5、HIF-1α及VEGF蛋白表达.结果:模型组大鼠心肌缺血4d后,梗死面积明显,且与假手术组比较,血清cTnT表达水平上升(P＜0.01),心肌组织中VEGF mRNA表达下降(P＜0.05), HIF-1α蛋白表达增加(P＜0.01),而AMPK α、HDAC5、VEGF蛋白表达变化不明显(均P＞0.05);与模型组比较,电针治疗4d后,模针组心肌梗死面积减少(P＜0.01),血清cTnT表达下降(P＜0.01),心肌组织中VEGF mRNA及蛋白和AMPKα、HDAC5、HIF-1α蛋白表达均上升(P＜0.05,P＜0.01).结论:电针可能通过活化心肌组织中AMPKα-HDAC5-HIF-1α信号级联,促进VEGF表达介导血管新生,减少心肌梗死组织面积,实现心肌保护效应.
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激活腺苷酸活化蛋白激酶α在苯扎贝特抑制氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞炎症中的作用
目的 探索激活腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)在苯扎贝特(BZF)抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症中的作用.方法 将HUVEC与ox-LDL 50 mg·L-1和(或)BZF(25～100μmol·L-1)共孵育24 h,荧光定量PCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)mRNA的表达.Western蛋白印迹法检测TNF-α,IL-6,ICAM-1,VCAM-1和NF-κB(P65)的磷酸化水平.采用分子对接软件Autodock探索AMPK用于进行分子对接的蛋白结构是AMPKα与β复合物,与BZF之间的相互关系.将原代HUVEC与BZF 25～100μmol·L-1孵育24 h后,Western蛋白印迹法检测p-AMPKα和AMPKα表达水平.BZF与AMPKα抑制剂Compound C 5μmol·L-1共孵育HUVEC 24 h,观察AMPKα对BZF抑制ox-LDL诱导HUVEC炎症的影响.结果 与细胞对照组比较,ox-LDL刺激24 h,HUVEC的TNF-α,IL-6,ICAM-1,VCAM-1和p-P65的表达明显升高(P<0.01);不同浓度BZF显著抑制ox-LDL诱导的HUVEC中TNF-α,IL-6,ICAM-1,VCAM-1和p-P65表达的升高(P<0.01).分子对接模拟显示,BZF与AMPK结合力为-8.66 kcal·mol-1.与细胞对照组比较,BZF能显著升高HUVEC中p-AMPKα的表达(P<0.01).与ox-LDL+BZF处理组比较,AMPKα抑制剂ox-LDL+BZF+Compound C组TNF-α,IL-6,ICAM-1和VCAM-1表达显著升高(P<0.01).结论 AMPKα的激活在BZF抑制ox-LDL诱导HUVEC炎症中发挥重要作用.
关键词： 腺苷酸活化蛋白激酶α 苯扎贝特 氧化低密度脂蛋白 血管内皮细胞 炎症 -
MPO对内皮细胞MCP-1表达的影响及二甲双胍的干预研究
目的 观察髓过氧化物酶(MPO)对内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响及二甲双胍的干预作用.方法应用western-blot检测内皮细胞内MCP-1、腺苷酸活化蛋白激酶α亚基(AMPK_α)蛋白表达,酶联免疫吸附法检测细胞培养液中单核细胞趋化蛋白-1的含量变化.同时应用RNA干扰技术,进一步观察AMPK_α的作用.结果MPO显著增加MCP-1的蛋白表达和培养液中MCP-1的浓度(P<0.01),随作用浓度和时间增加而显著增强.二甲双胍显著减少内皮细胞MCP-1的蛋白表达和培养液中MCP-1的浓度(P<0.01),而AMPK_αSiRNA干预后,二甲双胍对内皮细胞MCP-1的影响作用显著减弱(P<0.01).结论MPO可刺激内皮细胞MCP-1的蛋白表达和分泌,二甲双胍通过促使AMPK_α磷酸化,激活AMPK_α,抑制MPO对内皮细胞的促炎性反应,从而发挥其有益作用.
关键词： 髓过氧化物酶 内皮细胞 单核细胞趋化蛋白-1 二甲双胍 腺苷酸活化蛋白激酶α
