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加味丹参饮对大鼠心肌缺血再灌注损伤SSAT活性的影响
目的 观察加味丹参饮对SD大鼠心肌缺血再灌注损伤(IRI)模型精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)/多胺通路的影响,探讨其抗IRI的机制.方法 结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min再灌注90 min建立大鼠心肌IRI模型.实验大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和加味丹参饮组,每组10只.TTC染色测定大鼠心肌梗死面积,ELISA检测大鼠心肌组织SSAT含量,RT-PCR和Western blot分别检测大鼠心肌组织SSAT mRNA和蛋白表达,HPLC检测大鼠心肌组织多胺(腐胺、精脒、精胺)含量.结果 与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积、SSAT含量增加,SSAT mRNA和蛋白表达升高,多胺含量降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,加味丹参饮组大鼠心肌梗死面积、SSAT含量减少,SSAT mRNA和蛋白表达降低,多胺含量升高(P<0.05,P<0.01).结论 加味丹参饮可能通过调节SSAT/多胺通路,增加心肌细胞多胺含量,从而对大鼠心肌IRI发挥保护作用.
关键词： 加味丹参饮 心肌缺血再灌注损伤 多胺 精脒/精胺乙酰转移酶 大鼠 -
用SiRNA沉默SSAT基因表达降低人A549肺癌细胞对抗癌多胺类似物CPENSpm的敏感性
目的 探讨精脒/精胺乙酰转移酶(Spermidine/Spermine N~1-Acetyltransferase,SSAT)基因表达沉默对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响.方法 用SiRNA技术获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法用于分析SSAT基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA片段化分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况.结果 成功获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株.用10 μmol·L~(-1) CPENSpm处理对照细胞24h可使SSAT mRNA水平升高23倍,但在SSAT表达沉默的细胞中CPENSpm无此影响.细胞增殖实验发现,SSAT表达沉默的细胞对CPENSpm (0～20 p·mL~(-1))的药物敏感性显著性低于对照细胞.细胞凋亡分析发现,10 μmol·L~(-1) CPENSpm处理细胞48 h导致对照细胞出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象和亚凋亡峰,但在SSAT表达沉默的细胞株中,CPENSpm诱导细胞凋亡的能力明显减弱.结论 CPENSpm诱导肿瘤细胞内SSAT高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一.
关键词： 精脒/精胺乙酰转移酶 siRNA 多胺类似物 肺癌细胞 药物敏感性 -
大鼠心肌多胺代谢限速酶ODC、SSAT活性分析
目的建立大鼠心肌多胺代谢限速酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)及精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)活性分析方法.方法以Langendorff离体灌流心肌为实验材料,制备心肌组织匀浆;分别以dl-[1-14C]Ornithine及[1-14C]acetyl-Coenzyme A为底物,以液体闪烁计数仪记录生成的14CO2及[14C]acetyl spermidine的放射活度,并以其代表ODC,SSAT的活性;计算大鼠心肌ODC、SSAT的酶促反应动力学参数,筛选出适宜的底物浓度;同时观察一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对酶活性的影响.结果①大鼠心肌ODC、SSAT基础活性分别为:(9.67±3.09) nmol·mg-1 Pro·h-1;(3.59±0.91) nmol·mg-1 Pro·min-1.②ODC催化L-Ornithine的酶促反应动力学参数Km=(54.95±8.14)μmol·L-1; Vmax=(2.364±0.37)nmol·mg-1·h-1;SSAT催化Acetyl-Coenzyme A的酶促反应动力学参数Km=(12.87±1.88)μmol·L-1;Vmax=(0.50±0.07)nmol·mg-1·min-1.③大鼠心肌ODC、SSAT活性检测的底物浓度分别为:90 μmol·L-1 (18.5 kBq) DL-[1-14C]Ornithine及36 μmol·L-1 (2.96 kBq)[1-14C]acetyl-Co A.④SNP呈浓度依赖性地抑制ODC的活性、诱导SSAT的活性.结论建立了大鼠心肌多胺代谢限速酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)及精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)活性的分析方法,该方法简便易行;根据Km值确定测定大鼠心肌ODC及SSAT的底物浓度;证明NO具有抑制多胺合成代谢,促进多胺分解代谢的作用.
关键词： 大鼠 心肌 鸟氨酸脱羧酶 精脒/精胺乙酰转移酶 方法
