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黄连解毒汤乙酸乙酯提取物对光滑念珠菌黏附作用的影响
目的:探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Huanglian Jiedu decoction,EAHD)对光滑念珠菌Candida glabrata黏附作用的影响.方法:采用二倍稀释法测定黄连解毒汤乙酸乙酯提取物对光滑念珠菌的低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);采用XTF还原法评价EAHD对光滑念珠菌黏附作用的影响;利用倒置显微镜、扫描电子显微镜与荧光显微镜观察EAHD对光滑念珠菌早期黏附形态学影响;采用半定量与实时荧光定量PCR检测其黏附相关基因EPA1,EPA6和EPA7的表达量.结果:EAHD对光滑念珠菌的MIC为320 mg·L-1,阳性对照药氟康唑对光滑念珠菌的MIC为1 mg· L-1;EAHD对光滑念珠菌2,4h的黏附的干预作用较明显,其中对4h效果优于2 h;PCR结果显示EAHD可显著抑制EPA1,EPA6和EPA7的表达.结论:EAHD可能通过抑制光滑念珠菌部分黏附基因的表达而抑制其早期黏附.
关键词： 黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(EAHD) 光滑念珠菌 黏附 -
黄连解毒汤联合氟康唑对耐药白念珠菌麦角甾醇的影响
目的:探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Huanglian Jiedu decoction,EAHD)联合氟康唑(fluconazole,FLZ)对耐药白念珠菌生物膜麦角甾醇的影响.方法:采用CLSI M27-A3的微量稀释法测定EAHD与FLZ对白念珠菌FLZ耐药株的MIC与SMIC80;棋盘稀释法测定EAHD与FLZ联用对白念珠菌的协同效应;稀释涂布平板法考察EAHD与FLZ联用不同时间对菌体的杀伤作用;分别用HPLC和qRT-PCR法检测耐药白念珠菌生物膜麦角甾醇含量及相关基因的变化.结果:对于9株白念珠菌FLZ耐药株,EAHD对其MIC介于156～1 250mg· L-1,FLZ对其MIC介于256～2048 mg· L-1以上,二者联用后MIC显著降低,FICI(部分抑菌浓度指数)低达0.066;EAHD单用对其SMIC80均高于1 250 mg·L-1,FLZ单用对其SMIC80均高于512 mg·L-1,高可达2048 mg·L-1以上,联用组除个别组具有相加作用外也均有协同效应.时间杀菌(time kill,TK)实验显示当作用12 h,二者联用杀菌效应强.HPLC结果显示联用组、EAHD组与空白组麦角甾醇量相比,分别降低了近85％,50％.qRT-PCR检测FLZ组ERG1,ERG2,ERG6,ERG7,ERG11均上调,ACS1,ACS2,MET6均下调;EAHD组所有基因均下调;联用组ERG2,ERG6,ERG11均显著上调,ERG1,ERG7,ACS1,ACS2,MET6均显著下调.结论:EAHD协同FLZ抗白念珠菌耐药株,可能与抑制麦角甾醇合成相关基因的表达来降低麦角甾醇的合成有关,造成细胞膜损伤,抑制菌体生长.
关键词： 黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(EAHD) 耐药白念珠菌 生物膜 协同作用 麦角甾醇
