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β-咔啉类生物碱抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭的机制研究
该研究主要探索β-咔啉类生物碱抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭的机制与黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因表达的相关性.采用CCK-8法测定不同浓度条件下β-咔啉类生物碱对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制率;并通过Transwell小室测定β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞迁移与侵袭能力的影响;qRT-PCR及Western blot技术检测FAK基因mRNA及蛋白的表达差异.然后将si-FAK-1051重组质粒转染到SGC-7901细胞中,再次采用qRT-PCR及Western blot技术鉴定FAK基因沉默效果,后采用同样的方法检测FAK基因沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响.随着β-咔啉类生物碱浓度增加,人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐升高,IC50=13.364 mg·L-1;阳性对照组(5-FU,5 mg·L-1)和β-咔啉类生物碱组中Transwell小室内SGC-7901细胞均可见显著减少(P＜0.01),且β-咔啉类生物碱组SGC-7901细胞数目较阳性对照组明显降低(P＜0.01);阳性对照组、β-咔啉类生物碱实验组FAK基因mRNA及蛋白表达水平较空白对照组显著降低(P＜0.05).si-FAK-1051转染入胃癌SGC-7901细胞后,FAK基因的mRNA及蛋白表达被明显下调(P＜0.05),细胞增殖和细胞迁移能力也显著降低(P＜0.05).β-咔啉类生物碱较5-FU具有更有效的抑制胃癌SGC-7901细胞迁移与侵袭能力,而该机制可能与β-咔啉类生物碱抑制FAK基因mRNA及蛋白表达水平有关.
关键词： β-咔啉类生物碱 胃癌SGC-7901细胞 黏着斑激酶 -
氟的β-咔啉类生物碱的合成
目的:探索β-咔啉类化合物的合成方法.方法:以色氨酸为原料,经酯化、"一锅煮"反应两步合成β-咔啉类衍生物.结果:得到三个三位取代的含三氟甲基β-咔啉类化合物,产物结构经红外光谱、核磁共振光谱、质谱确证.结论:本路线优于已有文献报道方法.
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β-咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨
目的 观察β-咔啉类生物碱对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 不同浓度β-咔啉类生物碱处理人胃癌SGC-7901细胞48 h后,检测细胞增殖、凋亡情况,并以荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别测定细胞中抑癌基因PTEN、蛋白激酶β(AKT)基因mRNA及其蛋白表达.结果 不同浓度的β-咔啉类生物碱均能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,其中40 μg/mL浓度的抑制效果较其他浓度及5-Fu干预组更显著(P＜0.01),并可诱导细胞凋亡.不同浓度β-咔啉类生物均可引起PTEN mRNA和蛋白表达增加,AKT mRNA和蛋白表达减少,其中40 μg/mL浓度的调节效果较其他浓度及5-Fu干预组更显著(P＜0.01).结论 β-咔啉类生物碱可抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导凋亡,其作用机制可能是通过上调PTEN及下调AKT蛋白的表达实现.
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β-咔啉类生物碱对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响
目的：探讨β-咔啉类生物碱对人胃癌细胞 SGC-7901增殖的影响。方法通过体外培养人胃癌细胞株 SGC-7901，将含有不同浓度（5、10、20、40μg/mL）β-咔啉类生物碱的培养液与 SGC-7901细胞共同培养24 h 和48 h。采用 MTT 比色法计算细胞抑制率；在荧光显微镜下用 Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞形态学改变；流式细胞仪检测凋亡率及基因组DNA 琼脂凝胶电泳检测凋亡梯状条带。结果β-咔啉类生物碱对 SGC-7901细胞的损伤呈浓度依赖性；β-咔啉类生物碱分别作用24 h 和48 h 后半数抑制浓度（IC50）分别为17．79μg/mL 和12．17μg/mL；荧光染色可观察到有细胞核固缩及核断裂的凋亡现象；流式细胞术显示：阴性对照组（0μg/mL）及β-咔啉类生物碱5、10、20、40μg/mL 浓度组24、48 h 凋亡率为别1．66％、11．27％、20．32％、30．66％、41．42％和3．84％、15．29％、23．34％、34．87％、49．54％，细胞凋亡率伴随给药浓度增加而增加；基因组 DNA 琼脂糖凝胶电泳检测到明显的凋亡梯状条带。结论β-咔啉类生物碱能诱导人胃癌 SGC-7901细胞发生凋亡，抑制细胞增殖。
关键词： β-咔啉类生物碱 人胃癌 SGC-7901 细胞增殖 细胞凋亡 -
三种不同方法检测β-咔啉类生物碱所致的人胃癌SGC-7901细胞凋亡
目的：比较分析目前常用的三种检测细胞凋亡方法在不同β-咔啉类生物碱浓度条件下所致人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的运用。方法将生长状态良好的细胞按不同的给药浓度分为A组40μg/ml，B组20μg/ml，C组10μg/ml，D组5μg/ml，E空白对照组，作用24h、48h。分别用MTT法、Hoechest33258细胞核染色法、流式细胞术检测细胞凋亡。结果 MTT法结果显示，A组、B组、C组、D组与E组相比较，生长抑制率差异有统计学意义(P<0.01)；Hoechest33258细胞核染色法显示，E组细胞核浓染、边集、碎裂较少，其他组细胞核均有不同程度的改变，A组、B组、C组、D组与E组相比较，凋亡核百分比差异有统计学意义(P<0.05)；流式细胞仪检测结果显示，A组、B组、C组、D组与E组细胞凋亡率相比有统计学差异(P<0.01)。结论β-咔啉类生物碱能引起人胃癌SGC-7901细胞凋亡。
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β-咔啉类生物碱诱导人胃癌细胞株SGC-7901细胞凋亡的研究
目的 观察β-咔啉类生物碱诱导人胃癌细胞株SGC-7901细胞凋亡的形态学改变,探讨其作用机制.方法 将β-咔啉类生物碱设定为浓度0、5、10、20、40 μg/mL,分别用其处理人胃癌细胞株SGC-7901 48 h,透射电镜观察其对SGC-7901细胞超微结构的影响;荧光显微镜观察其对SGC-7901细胞凋亡形态的影响.结果 透射电镜结果可见SGC-7901细胞超微结构改变,提示其可诱导细胞凋亡;Hoechst 33258荧光染色分析,在不同浓度β-咔啉类生物碱(0、5、10、20、40 μg/mL)作用下,SGC-7901细胞凋亡率分别为(3.25±0.25)％、(6.30±0.39)％、(9.34±0.54)％、(11.33±0.37)％、(19.86±0.55)％,0μg/mL组分别与其他药物浓度组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 β-咔啉类生物碱可诱导人胃癌SGC-7901细胞株发生凋亡.
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β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞迁移、细胞侵袭和相关通路基因的影响
目的 探索β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞迁移、细胞侵袭,和PI3 K/AKT及MAPK/ERK通路基因mRNA,以及蛋白水平的抑制作用.方法 通过CCK-8法测定不同浓度条件下β-咔啉类生物碱对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制率;通过Transwell小室测定β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞迁移、侵袭能力的影响;利用qRT-PCR、Westem blotting技术检测相关基因mRNA及蛋白的表达差异.结果 随着β-咔啉类生物碱浓度增加,人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐升高,IC50=13.364μg/mL;阳性对照组(5-FU,5μg/mL)、β-咔啉类生物碱组中Transwell小室内SGC-7901细胞均可见显著减少(P＜0.01),且β-咔啉类生物碱组SGC-7901细胞数目较阳性对照组明显降低(P＜0.01);阳性对照组、β-咔啉类生物碱实验组GRB2 、PI3Kp85a、FAK基因mRNA表达水平较空白对照组显著降低(P＜0.05),而STAT3、ERK1、ERK2基因mRNA表达水平无统计学差异(P＞ 0.05);β-咔啉类生物碱组PI3Kp85a、p-ERK1/2、AKT蛋白表达水平显著低于空白对照组1与阳性对照组(P＜0.05).结论 较5-FU,β-咔啉类生物碱具有更有效的抑制胃癌SGC-7901细胞迁移1与侵袭能力,而该机制可能与β-咔啉类生物碱抑制PI3Kp85a、p-ERK1/2、AKT蛋白表达水平有关.
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β-咔啉类生物碱对人胃癌 SGC-7901细胞凋亡及 PTEN、ERK mRNA 表达的影响
目的：探讨β-咔啉类生物碱对体外培养的人胃癌细胞株 SGC-7901细胞的凋亡作用及 PTEN、ERK mRNA 表达的影响。方法体外培养人胃癌 SGC-7901细胞，用 CCK-8法测定不同浓度、不同时间β-咔啉类生物碱对胃癌细胞株的生长抑制率；用流式细胞技术检测细胞的凋亡；RT-PCR 法检测 PTEN、ERK mRNA 表达的变化。结果β-咔啉类生物碱体外能抑制人胃癌细胞株 SGC-7901细胞的增殖，促进了人胃癌 SGC-7901细胞凋亡。不同浓度的对β-咔啉类生物碱作用于人胃癌 SGC-7901细胞24、48 h 后，PTEN mRNA 的表达增高，ERK mRNA的表达减少，且呈剂量时间依赖性（P ＜0．05）。结论人胃癌 SGC-7901细胞对β-咔啉类生物碱具有药物敏感性，β-咔啉类生物碱能诱导体外培养的胃癌细胞凋亡，其作用机制可能与β-咔啉类生物碱诱导胃癌细胞中 PTEN-mRNA 的表达增高和 ERK mRNA 的表达减少有关。
关键词： β-咔啉类生物碱 人胃癌SGC-7901细胞 PTEN ERK -
β-咔啉类生物碱抗肿瘤的研究进展
目的:β-咔啉类生物碱是从植物骆驼蓬中提取出的有效单体,具有中枢兴奋、抗菌、抗寄生虫、抗肿瘤等多方面药理作用.本文对近年来有关β-咔啉类生物碱通过诱导细胞凋亡发挥抗肿瘤药效方面的研究情况进行总结,主要包括β-咔啉类生物碱体内外抗肿瘤药效、β-咔啉类生物碱诱导肿瘤细胞凋亡的检测方法及分子机制,为研究其抗肿瘤应用方面提供参考.
