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利用单克隆抗体特异性敲除技术解析中药药效物质基础的新方法
中药药效物质基础研究是实现中药现代化的关键问题之一.作者将小分子单克隆抗体技术引入中药药效物质基础研究,利用中药活性成分的单克隆抗体制备相应的免疫亲和色谱柱,实现从药材或复方中特异性地“敲除”该化合物,而“原样”保留其他成分在量和比例关系上不变,通过药理药效的比较研究,来明确揭示该成分与整体中药或复方功能主治的关联度.利用单克隆抗体特异性敲除技术解析中药药效物质基础,是符合中药自身特点的药效物质基础研究新方法,获得的研究结果不仅有助于从全新的角度理解物质基础,而且有助于理解中药单味药内部,或复方药味之间“配伍”的现代科学意义.
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特异性敲除CD147基因抑制小鼠非酒精性脂肪性肝炎的机制研究
目的:研究特异性敲除小鼠CD147基因抑制其非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的可能作用机制.方法:选择8周龄小鼠24只,其中12只敲除CD147基因,另12只不敲除.将敲除CD147基因的12只小鼠分为两组,每组6只.其中1组小鼠采用蛋氨酸-胱氨酸缺乏饲料(MCD)喂养,简称A1组;另1组小鼠采用正常饲料喂养,简称A2组.12只非基因敲除小鼠也分为两组,每组6只.其中1组小鼠采用MCD喂养,简称B1组;另1组小鼠采用正常饲养喂养,简称B2组.两周后处死小鼠,测定其血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、NLR家族Prin域3(NLRP3),并检测B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax蛋白)等表达.观察小鼠肝细胞凋亡情况.结果:HE染色与油红0染色显示,A1、A2组小鼠在2周时肝细胞变性程度明显弱于B1、B2组,P＜0.05;A1、A2组小鼠肝细胞凋亡数量明显少于B1、B2组,P＜0.05;A1、A2组小鼠血清ALl、AST、Bax水平低于B1、B2组,P＜0.05,而Bcl-2水平高于B1、B2组,P＜0.05;A1、A2组小鼠IL-1β、IL-18、NLRP3水平均低于B1、B2组,P＜0.05.A1、B1组小鼠血清ALT、AST、分别高于A2、B2组,但A1组小鼠ALT、AST则低于B1组.结论:特异性敲除小鼠CD147基因,可以减弱小鼠肝组织脂肪变性,减少肝细胞凋亡(下调促凋亡分子Bax水平,上调抗凋亡分子Bcl-2水平)、降低细胞因子IL-13、IL-18以及炎性小体NLRP3的表达,从而达到抑制NASH的目的.
