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加味五子衍宗丸神经保护作用靶点群的鉴定与功能分析
中药复杂体系的作用靶点群鉴定是中药药理机制研究的关键.该研究构建了一种表面键合有光敏二苯甲酮基团的磁性微球,利用紫外光激发下二苯甲酮基团活化并与中药化学成分中的碳氢键发生共价键合的特性,将中药加味五子衍宗丸的化学成分组键合到磁性微球表面,并与神经细胞裂解液共孵育,进而富集加味五子衍宗丸对应的神经保护靶点群.针对靶点群进行蛋白质组学分析,共发现32个潜在结合靶点.KEGG分析发现这些靶点主要与Hippo和Cell cycle信号通路关系密切,提示加味五子衍宗丸可能参与调控神经干细胞增殖和促进神经细胞分化.该研究从靶点源头上解释了加味五子衍宗丸发挥抗痴呆和神经保护作用的潜在药理机制,进而也提供了一种用于解析中药复杂成分体系作用靶点群的研究方法,可为今后中药方剂药理机制的科学诠释提供重要的方法学借鉴与参考.
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合欢皮总皂苷抗肿瘤作用靶点鉴定与分子机制解析
合欢皮作为常用中药,临床常用于治疗失眠、焦虑、肿瘤等.现代药理中针对合欢皮总皂苷(TSAJ)抗肿瘤活性多有报道,但由于单体成分分离困难,药理机制难以开展.该研究采用MTT法和Hoechst 33258染色法,确认了TSAJ对肝癌细胞的生长抑制作用,构建了表面修饰有TSAJ的固相亲合微球,利用该固相微球特异性地从人肝癌细胞裂解液中富集靶点蛋白,再利用高分辨质谱对富集到的靶点蛋白进行鉴定.采用MataboAnalyst 3.0处理数据,筛选并确定了Exportin-2,Beta-actin-like protein 2,Myosin-9,Protein transport protein Sec61 subunit beta,Cytochrome c oxidase copper chaperone等5个靶点蛋白.这些蛋白分别具有调控细胞凋亡及细胞生长、分化、运动等功能,提示TSAJ的抗肿瘤机制可能与诱导细胞凋亡及抑制肿瘤血管生成有关.综上所述,该研究利用TSAJ修饰的固相亲和微球,特异性富集并鉴定了TSAJ的靶点蛋白,从靶点源头上解释了TSAJ抗肿瘤作用机制,同时也为中药复杂体系的分子药理机制研究提供了一种全新的思路.
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基于靶点“钩钓”策略的肉苁蓉苯乙醇苷药理靶点鉴定及功效解析
目的 探究肉苁蓉苯乙醇苷类成分抗脑缺血再灌注损伤作用的靶点蛋白群及相关作用机制.方法 利用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断模型,考察肉苁蓉苯乙醇苷的脑保护作用.通过构建一种表面键合有肉苁蓉苯乙醇苷的琼脂糖固相微球,利用键合在固相微球表面的苯乙醇苷类分子从脑组织裂解液中特异性捕获相应的脑保护作用相关靶点蛋白,并进行高分辨质谱鉴定.结果 肉苁蓉苯乙醇苷能够显著改善大鼠脑缺血再灌注损伤,包括降低脑缺血面积、降低缺血相关行为学评分及提高脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)水平.利用靶点“钩钓”策略共获得HSP90等18个靶点蛋白.针对这些靶点蛋白的生物学功能,将其分为9类,包括抗氧化、离子通道、免疫调节、细胞存活、细胞骨架等.结论 从靶点源头上解释了肉苁蓉苯乙醇苷发挥抗痴呆、缓解疲劳、抗肿瘤、免疫调节等诸多作用的潜在药理机制,进而也展示了一种解析中药复杂成分体系分子药理机制的新方法.
