您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
实时荧光反转录环介导等温扩增文献资料
-
H5亚型禽流感病毒现场实时荧光RT-LAMP检测方法点的建立与优化
H5亚型禽流感是重要的人兽共患病,建立现场快速分子学检测方法是其防控关键.本实验首次借助热裂解法抽提病毒RNA,建立H5亚型禽流感病毒(H5 subtype avian influenza Virus,AIV-H5)实时荧光反转录环介导等温扩增(Fluorescent quantitative real-time reversetranscription-LAMP,qRT-LAMP)检测法,并对该法进行特异性、敏感性、可重复性及可靠性分析；同时对比钙黄绿素(Calcein)、SYBR Green Ⅰ、羟基萘酚蓝(Hydroxynaphthol blue,HNB)、SYTO 81四种荧光染色剂在颜色判定中的工作情况,筛选佳染料.试验结果显示本实验所建AIV-H5qRT-LAMP法可有效鉴别AIV-H5,其敏感性较国家标准实时荧光RT-PCR检测法高100倍,低检测限可达1个基因拷贝；该法与IBV、NDV等常见禽呼吸道传染病病原无交叉反应,特异性强；同时该法具有良好重复性.本实验筛选出佳染色剂Calcein.小规模田间试验显示该法用于AIV-H5的普查监测结果可靠.可见本实验建立AIV-H5 qRT-LAMP检测法可满足AIV-H5现场快速分子检测需求,具广阔应用空间.
关键词： H5亚型禽流感 实时荧光反转录环介导等温扩增 现场检测
