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融合表达DEC205单链抗体和NS3蛋白的HCV DNA疫苗的免疫原性研究
为研发新型HCV DNA疫苗并探讨优化其免疫原性的策略,我们分析靶向树突状细胞(Dendritic cells,DC)的分子对HCV DNA疫苗免疫原性的影响.我们基于抗小鼠DC细胞表面分子DEC205/CD205的单克隆抗体DEC205的单链分子,构建可单独表达DEC205单链抗体或者与HCV非结构蛋白NS3融合表达的DNA表达质粒,并构建单独表达HCV非结构蛋白NS3的DNA表达质粒;经瞬时转染法鉴定HCV NS3及其与DEC205单链抗体融合蛋白的表达;随后采用注射结合电转的方式免疫Balb/C小鼠并研究各疫苗的体液(NS3特异性IgG抗体)与细胞免疫(IFN-γ ELISPOT)效果.结果表明:DEC205单链抗体基因与HCV NS3编码基因的融合可显著增强NS3特异的免疫应答;采用皮内注射加卡钳电极电转的方式可以产生强的NS3特异性抗体和T细胞免疫反应.因此,通过DEC205单链抗体与HCV DNA疫苗靶抗原融合可明显增强免疫应答效果.该策略为HCV及其他类似病原的新型DNA疫苗研制提供重要依据.
关键词： 丙型肝炎病毒 DNA疫苗 NS3抗原 小鼠DEC205单链抗体 -
丙型肝炎病毒NS3抗原诱发肝细胞癌的分子生物学研究
目的 研究原发性肝细胞癌组织中的丙型肝炎病毒(HCV)NS3抗原的表达,探讨其分子生物学机制.方法 选取2008年1月-2011年1月医院收治的56例原发性肝细胞癌患者的手术切除标本及其癌旁组织为研究对象,应用原位杂交法和直接酶标免疫组化法分别测定肝癌及癌旁组织中HCV-RNA和HCAg-NS3的表达.结果 肝癌组织中HCV-RNA阳性表达表现为细胞核或胞浆内蓝紫色细小颗粒,阳性率为23.21％,高于癌旁组织(3.57％),比较差异有统计学意义(P＜0.05)；肝癌组织中HCAg NS3阳性表达表现为胞浆内棕黄色细小颗粒,阳性率为19.64％,高于癌旁组织(3.57％),比较差异有统计学意义(P＜0.05)；两种方法测定结果共同阳性者9例,共同阴性者41例,检出符合率为89.29％,经配对资料卡方检验,两种方法之间差异无统计学意义.结论 HCV NS3Ag主要弥漫分布于肝癌细胞胞浆内,炎性细胞和胆管上皮细胞内未发现HCV NS3Ag表达,说明其与肝细胞癌的发生有密切关系.
