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肛门生殖器区肿瘤组织中HPV的快速检测和分型
迄今已发现的人乳头瘤病毒(HPV)型已超过77型,其中至少有30个型与泌尿生殖道肿瘤有关.所以HPV的检测与分型对于泌尿生殖道肿瘤的病因和预后将是非常重要的.HPV有很大的异质性,故用常规的诊断技术来测定未知标本中的HPV基因型有一定困难.为此,我们应用了反向点杂交法(RDB)来检测HPV分型.即用7种序列特异性寡核苷酸探针分别对应7型HPV(HPV6B、11、16、18、31、33、35),这些探针被合成后依次固定在一条尼龙膜上形成7个点,再与样品DNA序列的PCR产物进行杂交.结果7型HPV中任一型阳性都可以在一条尼龙膜上鉴别出来.我们收集来自广州各大医院的标本,共计177例(除20例食道癌标本来自河南省外),用RDB来检测HPV和分型.结果如下:子宫颈癌86例,其中鳞癌68例,HPV阳性59例(86.76%);腺癌18例,HPV阳性8例(44.44%);尖锐湿疣42例,HPV阳性39例(92.86%);慢性宫颈炎29例,HPV阳性1例(3.45%);食道癌20例,HPV阳性7例(35.00%).
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反向点杂交法在β-珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断中的应用
目的：探讨反向点杂交法在β-珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断中的应用价值。方法抽取我院2012年10月至2013年10月收治的30例β-珠蛋白生成障碍性贫血患者采用反向点杂交法进行β-珠蛋白生成障碍性贫血基因检测，同时结合其相关临床资料进行回顾性分析。结果30例β-珠蛋白生成障碍性贫血患者中，发生CD41-42突变者13例（43.3%），发生IVS-2-654者6例（20.0%），发生TATAbox-28者5例（16.7%），发生CD17突变者4例（13.3%），发生CD43和CD26者各1例（3.3%）。结论给予β-珠蛋白生成障碍性贫血患者反向点杂交法诊断，能有效诊断患者的基因突变情况，临床应给予足够重视，并通过合理应用该诊断方式，加强产前诊断和防控。
关键词： 反向点杂交法 β-珠蛋白生成障碍性贫血 基因诊断 -
湖南地区β珠蛋白生成障碍性贫血90例基因分析
目的研究湖南地区β珠蛋白生成障碍性贫血基因突变频率及类型.方法采用反向点杂交法(RDB)对湖南地区90例β珠蛋白生成障碍性贫血患儿进行基因检测.结果 90例β珠蛋白生成障碍性贫血患儿中85例检出基因突变,其中 12例3种β珠蛋白生成障碍性贫血基因纯合子;31例8种β珠蛋白生成障碍性贫血基因双重突变子;42例突变杂合子.包括4种常见类型和3种罕见类型,即IVS-Ⅱ-654(C→T)、CD41-42(-CTTT)、CD17(A→T)、TATAbox-28(A→G)、CD14-15(+G)、TATAbox-29(A→G)及CD26(G→A).结论湖南地区是β珠蛋白生成障碍性贫血多发区之一,既有常见类型基因突变又有罕见类型基因突变.
关键词： β蛋白生成障碍性贫血 基因突变频率 反向点杂交法 -
反向点杂交法在β-地中海贫血基因诊断中的应用
目的应用反向点杂交法(RDB)对样本进行β-地中海贫血基因诊断,评价反向点杂交法对β-地中海贫血基因的诊断效能.方法使用反向点杂交法对1 294例疑似地中海贫血病例(材料包括外周血、羊水和脐带血)进行β-地贫基因诊断,并对其中10例进行测序;对其中890例与血液学试验指标进行比较.结果用RDB方法,1 294例样品中有558例β地中海贫血.在558例基因诊断阳性病例中共发现了21种突变,涉及到14个突变位点.前6位的突变位点从高到低依次排列为CD41-42(41.2%)、IVS-2-654(25.6%)、TATAbox-28(13.8%)、CD17(7.2%)、CD26(2.0%),CD 71-72(1.4%).与RDB比较,将临界值定为MCV≤80fL或MCH≤26Pg,脆性≤60%,HbA2＞3.8%,则敏感度分别为98.49%,89.17%,95.47%;特异性为68.97%,72.82%,77.08%.结论与血液学方法比较,RDB具有快速、准确的优点,适用于普通人群的β-地中海贫血分子检测和产前诊断.
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α和β地中海贫血的羊水产前基因诊断
目的研究单管多重PCR体系检测缺失型α-地中海贫血及反向点杂交法检测β-地中海贫血在产前诊断中的应用价值.方法应用单管多重PCR体系产前检测37例父母均为α-地中海贫血杂合子的风险胎儿的羊水地贫基因及应用反向点杂交法产前检测18例父母均为β-地中海贫血杂合子的风险胎儿的羊水地贫基因.结果 37例α-地中海贫血风险胎儿中检出Hb Bart纯合子7例,左缺失型H病3例,右缺失型H病2例.18例β-地中海贫血的风险胎儿检出2例IVS-nt 654/CD41-42双重杂合子,1例IVS-nt 654纯合子.结论应用单管多重PCR体系及反向点杂交法进行α和β地中海贫血产前羊水基因检测,能快速、准确作出诊断,从而预防重症患儿的出生,达到优生目的.
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某城区女性人乳头瘤病毒感染状况调查分析
目的 了解陕西省咸阳城区女性人乳头瘤病毒(HPV)感染状况及基因亚型的分布.方法 采用聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交法检测1 642例女性生殖道分泌物19种HPV基因亚型.结果 HPV总感染率为18.70%(307/1 642).19种亚型均被检出,其中高危型HPV感染268例,感染率为16.32%,低危型HPV感染39例,感染率为2.38%,二者比较差异有统计学意义(χ2=141.64,P<0.05).单一感染247例,感染率为15.04%,单一感染的感染率与多重感染比较,差异有统计学意义(χ2=93.83,P<0.05).感染高危型HPV基因型前5位者依次为HPV 52、16、58、51、53.在307例感染者中HPV 16、18感染47例(15.31%);单一型别感染247例(80.45%).结论 陕西省咸阳城区女性HPV感染率低于全国其他地区,以单一、高危型感染为主.应注重高危型HPV生殖道感染对宫颈上皮内瘤变(CIN)的病变进展及其预后评估.
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HPV-DNA分型联合宫颈脱落细胞类型检测在宫颈癌早期诊断中的价值
目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)-DNA分型联合宫颈脱落细胞类型检测在宫颈癌早期诊断中的价值.方法:350例宫颈病变患者,应用PCR反向点杂交法和液基薄层细胞检测(TCT)检测其宫颈分泌物HPV-DNA类型及宫颈脱落细胞类型,以子宫颈组织的病理学检查结果为依据,比较单纯HPV-DNA分型检测、单纯TCT检测、HPV-DNA联合TCT检测在子宫颈癌早期诊断中的阳性率、灵敏度、特异度及准确性.结果:HPV-DNA分型、TCT检测及阴道镜组织病理活检阳性率分别为32.3％、29.7％及20.6％,HPV-DNA分型和TCT检测均出现假阳性;以病理学检查结果为判断依据,HPV-DNA联合TCT检测对子宫颈癌诊断的阳性率及特异度,与单纯HPV-DNA或TCT检测比较,差异无统计学意义(P＞0.05);但HPV-DNA联合TCT检测对子宫颈癌诊断的灵敏度高于单纯HPV-DNA或TCT检测(P＜0.05),准确度虽升高,但仅与TCT检测差异有统计学意义(P＜0.05).结论:HPV-DNA联合TCT检测可显著提高宫颈癌早期诊断的灵敏度和准确性,对诊断特异度无影响.
