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saRNA调控NIS基因介导131I对肝癌HepG2细胞体外抑制作用的实验研究
目的 探索通过小激活RNA(saRNA)调控钠碘转运体(NIS)基因特异性表达介导肝癌核素显像和治疗的可行性,为RNA激活(RNAa)技术介导核素基因治疗肿瘤的应用提供实验依据.方法 saRNA的设计合成:通过基因BLAST比对,设计与合成三条针对NIS基因的saRNA序列;细胞转染:以LipofectaminTM 2000为saRNA载体,将saRNA转染到肝癌HepG2细胞后72h,采用Western blotting分析NIS蛋白的表达水平,筛选出RNAa效率高的saRNA,并进一步分析saRNA转染后不同时相NIS的表达水平,以及saRNA浓度-NIS表达水平的浓度-效应关系;体外核素摄取实验:体外培养条件下,评价转染肝癌HepG2细胞对125I的摄取;细胞生长增殖抑制实验:体外培养条件下,评价131 I对转染肝癌细胞的生长抑制率.结果 saRNA可上调NIS基因表达水平,其中saRNA482序列上调NIS表达水平高;saRNA上调NIS的峰值出现在转染后72h,NIS维持高表达水平在10d以上;且NIS上调水平随saRNA浓度增高而增高.体外培养条件下,转染细胞与未转染细胞的摄碘水平差别明显,其中高者摄碘较对照细胞高出64倍.体外培养条件下,相对未转染组肝癌细胞,131I对转染组HepG2细胞的生长抑制率为60.7％.结论 本研究设计合成的靶向NIS基因的saRNA可上调肝癌细胞NIS的表达水平,增强肝癌细胞摄取放射性碘的能力,研究还证实,通过RNAa调控NIS基因表达可介导131I治疗肝癌的潜力.
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dsRNA介导的PTEN基因表达上调及其与启动子区甲基化的关系
目的 观察以启动子区非CpG岛序列为靶点的dsRNA促进PTEN基因的表达,并探讨RNAa现象对PTEN基因启动子区DNA甲基化的影响.方法 将与PTEN基因启动子区非CpG岛DNA序列互补的双链RNA分子(dsPTEN) 转染入A549和H292肺癌细胞中,采用real-time聚合酶链反应(PCR)检测PTEN的表达,筛选能够促进PTEN基因表达的有效dsRNA序列.通过甲基化特异性PCR(MSP)产物测序,检测dsRNA转染前后启动子区甲基化程度的变化.结果 经多条dsRNA分别转染肺癌细胞,证实针对PTEN基因-57到-38的序列(dsPTEN2-2)转染H292肺癌细胞后出现PTEN基因表达的明显上调,上调高达5.1倍(与对照dsRNA比较,P<0.05),证实了RNAa现象的存在;使用5-Aza处理后的A549和H292细胞与空白组比较CpG点甲基化明显减少(5±3比10±4、6±3比9±3,P均<0.05),而转染PTEN2-2 dsRNA后的两个细胞株CpG点甲基化情况与未转染组比较无明显变化(9±2比10±4、9±3比9±3,P均>0.05).结论 dsRNA可以促进PTEN基因表达的上调,RNAa现象并不改变PTEN基因启动子区甲基化程度.
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RNAa效应研究及应用进展
RNAa (RNA activation)是指某些新发现的反标准非编码RNA (ncRNA)在转录水平上激活目的基因表达的现象,这种发挥激活作用的小分子RNA又叫小激活RNA (saRNA),属小分子双链非编码RNA家族,其作用机制尚未完全明了,但其应用前景已引起人们的关注.该文就RNAa的效应及其应用进展进行了综述.
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靶向性纳米载体及RNA激活系统在抗肿瘤运用中的研究进展
靶向性纳米技术以及RNA激活技术是抗肿瘤研究热点,本文简要论述了纳米药物载体在抗肿瘤靶向性研究的进展,以及RNA激活技术的机制;并对靶向性纳米载体与RNA激活技术在抗肿瘤方面联合运用的可行性及应用前景进行了分析.
