首页 > 文献资料
-
细胞培养实验中细胞系鉴定及质量控制重要性探讨
目的 以脑胶质瘤细胞系(U87)为例,探讨对在细胞培养实验中所使用的细胞系进行鉴定和质量控制的重要性.方法 对三株不同来源的U87细胞系进行STR分型检测,并结合显微镜下形态学特征,判断所测细胞系是否为真正的U87细胞系及是否发生交叉污染.结果 通过细胞STR分型结果与ATCC、DSMZ中STR数据库对比,得出U87-1细胞分型与ATCC中U-87 MG Glioblastoma-Astrocytoma Humanl00％匹配;U87-2细胞分型与DSMZ数据库中U-87MG100％匹配;U87-3未得到扩增产物,不能进行分型,原因是该细胞株为非人源细胞.结论 细胞培养实验中所使用细胞系的鉴定对于后续研究具有重要意义,可使用STR分型检测技术在细胞系培养过程中进行质量控制,对其进行准确鉴定,并排查是否存在细胞交叉污染.
-
miR-206靶向MAPK-1通路增强胶质瘤细胞放射敏感性
目的 研究miR-206对胶质瘤细胞放射敏感可能作用的信号通路,为深入研究其调控机理奠定基础.方法 将miR-206模拟剂或miR-206抑制剂转染到胶质瘤U87细胞中,使用抑制剂PD98059抑制MAPK通路活性并照射处理细胞,MTT和克隆形成实验检测细胞放射敏感性变化.分别用qRT-PCR和蛋白印迹法检测miR-206和MAPK1的表达变化,TargetScan软件预测和双荧光素酶报告实验验证miR-206和MAPK1的相互作用.结果 胶质瘤细胞放射处理后miR-206表达下调,MAPK1表达上调.miR-206模拟剂过表达miR-206,细胞增殖和克隆形成能力下降,放射敏感性增高;转染抑制剂抑制miR-206表达,细胞增殖和克隆形成能力加强,放射敏感性降低.使用TargetScan软件查找发现MAPK1可能是miR-206的靶基因,双荧光素酶报告实验进一步验证了miR-206和MAPK1具有相互作用.过表达或降低miR-206表达,MAPK1与miR-206呈相反变化趋势.使用抑制剂抑制MAPK信号通路,胶质瘤细胞放射敏感性升高.结论 miR-206可能靶向MAPK1,通过抑制MAPK信号通路活性调节胶质瘤细胞的放射敏感性.
-
STR分型技术鉴定后两株U87胶质瘤细胞系生物学特性评价
目的 对经过短串联重复序列(short tandem repeats,STR)分型检测技术鉴定后的两株U87胶质瘤细胞系[(美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection,ATCC)数据库中U-87 MG Glioblastoma-Astrocytoma Human和德国微生物菌种保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen,DSMZ)数据库中U-87 MG]进行细胞生物学特性测定,对两株细胞用于后续研究工作的可能性进行评价.方法 分别采用CCK-8法、划痕实验、Transwell实验等方法,并结合显微镜下细胞形态学特征,比较两株肿瘤细胞系的增生、迁移及侵袭能力等生物学特性.结果 (1) CCK-8法:细胞生长曲线提示细胞增生能力差异无统计学意义(P＞0.05).(2)划痕实验:两细胞系迁移能力差异无统计学意义(P＞0.05).(3) Transwell实验:两细胞系迁移能力差异无统计学意义(P＞0.05),DSMZ数据库中U-87 MG细胞侵袭能力高于ATCC数据库中U-87 MG Glioblastoma-AstrocytomaHuman细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 两株U87细胞系均可反映脑胶质瘤的生物学特性,可用于后续科研实验.两细胞系的增生、迁移能力差异无统计学意义,侵袭能力差异具有统计学意义,可根据实验目的选择合适的细胞系.
-
血清剥夺法分离U87细胞系中的胶质瘤干细胞
背景:细胞周期分析已证实,90%以上的干细胞处于G0静止状态,因此采用不含任何生长因子和其他相关营养添加剂的血清剥夺培养基更适合筛选分离肿瘤干细胞.目的:应用血清剥夺法培养胶质瘤U87细胞,并筛选鉴定该细胞系中的胶质瘤干细胞.方法:将U87细胞培养在只含有DMEM和L-谷氨酰胺的培养基中培养6 d,筛选出胶质瘤干细胞,接着更换为神经干细胞培养基,观察细胞肿瘤球的形成过程;将肿瘤球接种于血清培养基,观察其在体外的分化特点;免疫荧光鉴定血清剥夺后尚存的细胞、增殖形成的肿瘤球细胞和分化细胞.结果与结论:应用血清剥夺的方法成功地筛选出了表达CD133的肿瘤干细胞,并能增殖形成肿瘤球;肿瘤球可多向分化,子代细胞表达胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶.说明U87细胞系中存在具有自我更新及多向分化能力的胶质瘤干细胞.
-
恶性脑胶质瘤U87细胞系肿瘤干细胞放疗敏感性的体外实验研究
目的 探讨脑胶质瘤细胞系U87细胞及其肿瘤干细胞(CSCs)对体外放疗的敏感性.方法 应用神经干细胞(NSCs)培养基分离培养形成细胞球克隆,检测细胞球细胞的NSCs特性.采用不同剂量放射线照射U87细胞及其CSCs,应用集落形成实验和生存曲线检测其生存情况.结果 U87细胞在NSCs培养基中形成悬浮的细胞球克隆,具有自我更新和多向分化能力,表达CD133、Nestin;两种细胞的存活率均随照射剂量增加而下降,且CSCs的存活率明显高于U87细胞(P＜0.01).结论在体外条件下,CSCs的放射敏感性明显低于U87细胞,其可能是恶性脑胶质瘤放疗抵抗的主要原因.
-
应用长春新碱分离与鉴定U87细胞系中的胶质瘤干细胞
背景与目的:研究表明,肿瘤干细胞具有化疗抵抗性.本研究拟利用肿瘤干细胞对化疗药物耐受的特性,在培养基中添加长春新碱的方法从人胶质瘤细胞系U87中分离鉴定肿瘤干细胞.方法:U87细胞于含血清培养基中贴壁后,换用含有5 ng/ml长春新碱的神经干细胞培养基培养,获得第一代肿瘤细胞球后,将单细胞接种于神经干细胞培养基中,获得第二代肿瘤细胞球.免疫荧光检测巢蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulin Ⅲ)、髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)在第二代肿瘤细胞球及其分化细胞中的表达.结果:成功地获得了第一代肿瘤细胞球以及来源于单细胞的第二代肿瘤细胞球;细胞间紧密相贴,表面较光滑;神经干细胞标志物nestin在第二代肿瘤细胞球中呈阳性表达;第二代肿瘤细胞球分化细胞中可检测到nestin、GFAP、β-tubulin Ⅲ、MBP的表达.结论:U87细胞系中存在具有自我更新及多向分化能力的胶质瘤干细胞,采用神经干细胞培养基中添加长春新碱的方法能简单有效地从胶质瘤细胞系中分离培养出胶质瘤干细胞.
